应用lamp检弓形虫感染的研究.pdf

摘要 弓形虫病是由一种专性细胞内寄生的刚地弓形虫引起的一种人兽共患寄生虫病，广泛分布于 世界各地，弓形虫可感染包括人类在内的所有温血动物，甚至引起死亡。本病有三种传播方式， 其中经口传播途径是人类和动物感染的最主要的方式。弓形虫病不仅威胁人类健康，同时对畜牧 业生产造成一定经济损失。 目前，弓形虫病的诊断方法主要以普通病原学和免疫学诊断为主，而随着分子生物学技术的 不断发展，弓形虫病的分子诊断方法日益完善。本研究以弓形虫三磷酸核苷水解酶基因为靶基因， 虫三磷酸核苷水解酶基因，产生呈瀑布状的特异性条带，检测极限为20拷贝。经过比较试验，该 方法的敏感性比PCR高10倍，与犬新孢子虫、鹦鹉热衣原体、柔嫩艾美耳球虫、吕氏泰勒虫、羊 巴贝斯虫未定种、牛巴贝斯虫、边缘无浆体、支原体、伯氏疏螺旋体、副猪嗜血杆菌、猪链球菌 等病原体无交叉反应，特异性高，且重复性良好。 以猪和家兔为实验动物，按一定剂量人工接种弓形虫后，在猪的血液样本中，LAMP方法在 攻虫后2dRP可检测到弓形虫，而PCR方法在攻虫后4 d的样本中方可检测到弓形虫；家兔的组织 样本弓形虫诊断试验中，LAMP方法对心、肝、脾、肺、肾、膈肌、淋巴结进行检测，在脾和肺 中，LAMP方法在攻虫后l d可检测到弓形虫感染，而PCR方法在攻虫后2d检测到；在心、肌肉、 肾中，LAMP方法在攻虫后2 d检测到，而PCR方法比其晚ld；在肝和淋巴结中，两种方法都是在 攻虫后2d检测到样本中的弓形虫。 应用建立的LAMP方法对我国甘肃省185份羊血液样本，17份精神分裂症血液样本，43份鸡组 织样本进行检测，结果显示弓形虫的感染率分别为20．O％、52．9％、18．6％。 建立了特异、敏感的弓形虫LAMP方法，用所建立的弓形虫LAMP方法进行了猪、兔实验感 染弓形虫病的早期诊断，并进行了我国甘肃部分地区弓形虫病的流行病学调查，为开发研究弓形 虫病快速诊断试剂盒提供了理论依据。 关键词：弓形虫，三磷酸核苷水解酶基因，LAMP，早期诊断，流行病学调查 Abstract intraeellularcallcause disease． parasite，it epidemical Toxoplasmagondii,邪锄obligate parasitic As couldinfecthumansandallotherwarm·bloodedanimals，itnot threatens toxoplasmosis only alsoCaIISeSeconomiclosseson andWasconsideredtobeoneof humans’health,butgreat storkbreeding most inthe thethreetransmissionof the widespread world．Among waystoxoplasmosis， parasites most fecal-oralisthe common way． arc based and Thetraditional methods on etiology diagnosticoftoxoplasmosismainly