负载口蹄疫病毒p1-vp4融合蛋白质的树突状细胞启动的t细胞应答.pdfVIP

摘要 口蹄疫(foot-and-mouthdisease，FMD)是由口蹄疫病毒(FMDvires，FMDV)感染 偶蹄兽所引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。目前本病尚无有效的预防控制 措施。 原位点，含丰富的T、B抗原表位，VP4虽位于衣壳内部，相对比较保守，也富含T 抗原表位。 有效地刺激T细胞。因此，人们开始重视机体对FMDV细胞免疫应答的机制研究。 树突状细胞(Dendriticcells，DCs)是启动细胞免疫应答的专职抗原提呈细胞， 可通过巨吞饮、受体介导的内吞和吞噬三种方式摄取外源性抗原，经过多种抗原提呈 途径启动细胞免疫应答。目前尚不清楚DCs摄取FMDV抗原的方式以及DCs负载 FMDV抗原后启动细胞免疫应答的机制。 点，然后通过NcoI和BamH I和BamH II SK(+)．VP4和 建pET-32a-VPl。然后用Xho1分别对pBluescript 质粒转化表达宿主菌BL21(DE3)，进行诱导表达。通过对诱导表达条件的优化，根 性血清分别进行Western 经诱导表达和诱导条件优化，在分子量约为49kD处有一条明显的蛋白条带，在IPTG 浓度为1mmol／L，30℃诱导后5h时表达量最大。通过电洗脱纯化VPl．VP4融合蛋 白质。‘ 通过蛋白酶体抑制剂、溶酶体抑制剂、甘露糖受体抑制剂、清道夫受体抑制剂和 组为对照，在共培养后9、24、48、72和96h，取其共培养上清液，ELISA检测其中 IFN吖和IL．4含量。结果显示，各组在各个时间点上产生的IL-4的含量均显著低于 IFN吖含量。蛋白酶体抑制剂处理组在每个时间点产生的IFN吖含量均低于不经抑制 融合蛋白抗原的过程中发挥着更重要的作用。甘露糖受体抑制剂处理组在每个时间点 产生的IFN-丫含量均高于不经抑制剂处理试验组(除24h，P0．05)，说明甘露糖受 道夫受体抑制剂处理组在每个时间点产生的IFN吖含量均高于不经抑制剂处理试验 组，说明清道夫受体对负载VPl一VP4融合蛋白的BMDCs启动T细胞应答也起到抑 制作用；巨胞饮抑制剂处理组在每个时间点产生的IFN-7含量均明显低于甘露糖受体 抑制剂处理组、清道夫受体抑制剂处理组和不经抑制剂处理试验组，说明巨胞饮是 BMDCs捕获VPl．VP4抗原的主要方式。 以上体外抗原提呈试验结果显示，负载FMDVVPl．VP4融合蛋白的BMDCs能 够有效地激活淋巴结T细胞，巨胞饮是BMDCs摄取VPl．VP4融合蛋白抗原的主要 方式，甘露糖受体和清道夫受体的识别作用对负载VPl．VP4融合蛋白之BMDCs启 动淋巴结T细胞具有抑制作用。这些实验结果不仅为进一步研究BMDCs对FMDV VPl．VP4融合蛋白质抗原的提呈机制打下了基础，而且对新型FMD疫苗的设计与开 发也具有理论指导作用。 关键词：口蹄疫病毒；VPl．VP4融合蛋白质；树突状细胞；抗原提呈；T细胞 cell dendriticceHs withVPl一VP4fusion of T responsestriggeredby pulsed protein foot-and-mouthdiseasevirus Author：LiNa Jia-Xin Supervisor：．Professor Wang Medicine Major：PreventiveVeterinary Abstract Foot-and—mouth a disease