抗鹅α干扰素单隆抗体的制备及初步鉴定.pdfVIP

摘要 摘 要 素的分子结构、基因结构和分子生物学特性一直被人们所关注。干扰素是一种低分子量的可 溶性糖蛋白，具有抗病毒和抗肿瘤的作用。干扰素分为I型干扰素和II型干扰素，前者包括 细胞、B淋巴细胞、慢性髓性白血病细胞、鸡新城疫病毒(NDV)或水泡性口炎病毒(vsv)等诱 导后的成纤维细胞产生。 用本实验室已构建的含鹅a干扰素基因的真核表达载体pcDNA3．1．IFN．a作为免疫原， 免疫Balb／C鼠，以原核表达的重组GolFN．a作为检测抗原，检测抗鹅q干扰素的单克隆抗 体。经过细胞融合，以间接ELISA方法和有限稀释法进行筛选，经3～5次亚克隆，获得2株 能稳定分泌抗鹅口干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为2H6和4C8。 经鉴定，2株杂交瘤细胞染色体数目分别为103和89条；单抗亚类均为IgM，轻链为1c链； 杂交瘤细胞株连续传20代以上及冻存后复苏，细胞生长良好，效价稳定；腹水效价均达到104 以上；Westernblot表明，MeAb 测结果显示，McAb4C8能,与天然干扰素发生竞争抑制作用，为进一步进行干扰素的检测奠定 了基础。由于2株单抗与天然及重组干扰素发生的特异性反应有所区别，估计2株细胞抗体可能 分别针对不同的抗原表位；单抗中和活性检测结果显示，McAb4C8能够中和天然干扰素的抗 病毒作用。 总之，McAb2H6及4C8的制各为进一步研究和检测鹅IFN．a提供了有利的前提条件，并为 鹅Ⅱ干扰素在免疫机制研究、免疫功能检测、纯化鹅IFN．a等领域提供了广泛的应用前景。 中和活性 III Abstract andCharacterizationofMonoclonal Preparation InterferonaofGoose Antibodyagainst Abstract focusedtoresearchmolecular andbioactivitiesof People composition，geneexpression that arole IsaacsandLindenmannfrom foundIFNin1957．IFNplay interferon(IFN)，after England in and dissoluble antitumorantiviruswaslowmolecular weight sugarprotein．IFN includes all role I IFN-aand II IFN(includingIFN-p)andIFN(i．e．IFN-7)．IFN-if,playedimportant inantivirus．IFN-ais from cell，KG·1cell，B leucocyte，Namaiwa and leukemiacellandfibroblastinducednewcastlediseaseviruscell vesicular myelogenous by stomatitisv