嗜水气单胞菌的离鉴定及控制方法研究.pdfVIP

嗜水气单胞菌的分离鉴定及控制方法研究 摘 要 嗜水气单胞菌感染的主要对象是水产动物性食品，随着人们对水产品消费 量的不断增加，其作为致病微生物的地位已被确定，并且日益成为的当前水产 品质量与卫生安全关注的重要对象。本文对病死鱼体内嗜水气单胞菌的分离鉴定及 其控制方法进行了研究，主要结果如下： 1)嗜水气单胞菌的分离鉴定。本实验从自然发病的出血性败血症异育银鲫 体内分离得到20株致病菌，经人工回归感染实验证明其具有较大的毒力，在 此基础上分析了菌株的生理生化特性，研究了其药敏特性，并通过对典型菌株 L1的16S rRNA序列分析构建系统发育树，以期丰富异育银鲫出血性败血症致 病菌的病原生物学特性，为异育银鲫细菌性病害的有效防治提供科学理论依 据。 2)嗜水气单胞菌灭活疫苗的制备。选取嗜水气单胞菌菌株L1为疫苗制作 的出发菌株，测定嗜水气单胞菌的OD值和生长曲线，并通过正交实验确定了 嗜水气单胞菌L1的最适培养条件为：蛋白胨109／L，酵母膏159／L，蔗糖79／L， K2HP044．569／L，同时通过优化得出制作灭活疫苗的条件为：灭活温度28℃， 甲醛终浓度0．2％，灭活时间36h。研究结果表明，灭活疫苗的安全性较高，且 采用注射接种方式对草鱼的免疫保护率高达90％。 3)灭活疫苗对异育银鲫败血症血液和生化指标的影响研究。为研究灭活疫 苗对嗜水气单胞菌感染后的异育银鲫的血液和生化指标的影响，将异育银鲫随 机分为对照组、感染组和免疫组，在处理后18h和36h时断尾采血，分离得到 抗凝血和血清，分别测定8项血液指标和13项与免疫相关的生化指标。处理 后18h，感染组与对照组相比，谷丙转氨酶、谷草转氨酶、Cl一差异显著(P0．05)， 其他指标无显著差异(p0．05)，而免疫组与对照组之间均无差异；处理后36h， HCT、总蛋白、总胆红素、白蛋白、肌酐、尿酸)差异显著(p0．05)，免疫组 果表明，灭活疫苗能够对鱼体产生较强的免疫保护力，有助于减轻致病菌对鱼 体的损害程度，增强了鱼体的免疫抵抗力。 4)银鲫鱼肠道中益生菌菌株的筛选与血液生化影响分析。通过平板涂布法 从健康的银鲫肠道中分离纯化到60株菌株，以嗜水气单胞菌为指示菌，点种法 Ⅳ 初筛得到12株菌株，再通过牛津杯实验筛选出4株对嗜水气单胞菌有明显抑制作 用(抑菌圈直径在14mm以上)的益生菌疑似株，并进行了耐热试验、耐酸试验 和人工肠液耐受试验，筛选出最符合益生菌功能特性的菌株YJ一9。该菌株在90C 高温水浴30min后相对存活率为1．5 1％，在pH为3的液体培养基中4h内相对存活 06 率为8．37％，活菌数都保持在1CFU／mL以上，并且可以在人工模拟肠液中缓 慢生长。在急性毒力实验中，10倍于实验剂量的菌株YJ．9对银鲫无毒，动物保 护实验证明菌株YJ．9能有效增强银鲫对嗜水气单胞菌的免疫抵抗力，相对保护 率达到80％。研究结果表明，菌株YJ．9可以作为一个新的饲用微生态制剂候选 菌种。通过血液指标的测定表明，益生菌可以在鱼受到嗜水气单胞菌感染时有 效保护鱼体的肝脏和肾脏，有助于减轻致病菌对鱼体的损害程度，增强了鱼体 的免疫抵抗力，但是其防治效果不及疫苗。 关键词：嗜水气单胞菌；益生菌；疫苗；免疫保护率；异育银鲫； V onIsolatio and n，Identincation Study Controlling A ila Methodsoferomonas droph ABSTRACT Themain infectedAeromonaswas animalfoodandits