豌豆早期结瘤素因克隆及psenod12a与pslectin基因导入烟草研究.pdf

摘 要 PsLee tin基因导入烟草研究 蔬菜学专业硕士研究生黎林 指导教师 张兴国研究员 摘 要 共生固氮结瘤是豆科植物与根瘤菌硒者相互作用的结果。从根瘤菌接触根毛至形成成熟 根瘤的过程。其实就是根瘤菌和宿主植物的有关基因的表达及其基因表达产物之间相互作用 的过程。这个过程涉及根瘤菌与植物两者之间的分子对话、相互识别、信息传导和基因表达 的复杂网络调控。如果能把这个过程的各个环节诠释清楚。不但可以改善或促进豆科植物的 共生固氮，而且有可能在菲豆科植物，特别是主要农作物上实现共生固氮，从而提高农作物 的产量与品质，大大缓解在氮肥生产和旌用过程造成的资源紧缺和环境污染的压力，造福于 人类。 目前研究已经证明，植物凝集素在豆科植物识别根瘤菌的过程中起着不可缺少的重要作 用，通过豆科植物间凝集素基因的转化，可使一些豆科植物识别原本不能识别的根瘤菌。一 种植物在不同的生态环境可与多种根瘤菌共生，说明豆科植物与根瘤菌共生的多样性，这也 (1991)分别将豌豆凝集素转入到马铃薯、烟草中；王逸群、荆玉祥(1999)进行了豆科植物凝 集素基因和植物血红蛋白基因双价基因的植物表达载体的构建，并分别转化到烟草和水稻，研 究凝集素在转基因植株中的细胞生物学定位及其表达机制，以期最终能实现将豆科植物凝集 素基因转化到非豆科植物，并能使非豆科转基因植株识别相应的根瘤菌，通过凝集素基因扩 大根瘤菌宿主范围。 共生固氮体系中，在宿主植物内部有一类基因在根瘤菌入侵根毛到固氮根瘤的形成过程 中表达，被称之为结瘤素基因(NodulinGene)，并依表达时间先后而分为早期结瘤素基因和 晚期结瘤素基因。早期结瘤素基冈在根瘤发育早期表达，参与“根瘤菌一根毛”相互作用及 根瘤形态发生过程，对植物与根瘤菌之问的信息传递、根瘤菌的侵染及根瘤的形成有着重要 作用。到目前为止，越来越多的早期结瘤素基冈已经被鉴别出来，并得到克隆和测序，但是 人们对这些基因作用机理的研究还不是很透彻，也需要探讨将这些早期结瘤素基因从宿主豆 科植物转移到非豆科植物后的功能与作用。 两南大学硕十学1={7=论文 本研究通过特异引物、PCR技术从豌豆基因组DNA中克隆出早期结瘤素基因 构建成了植物双元表达载体pvcr2120，用农杆菌介导法转入烟草。主要实验结果如下： 1．克隆了豌豆早期结瘤素基因PsENODl2A 列分析表明，该基因全长1282 bp，含有编码110个氨基酸的333bp的开放阅读框和936bp 序列的周源率分别为99．9％(仅有1个碱基不同话口100％。 2．克隆了豌豆早期结瘤素基因PsSym7 以豌豆基因组DNA为模板，利用兼并引物和PCR技术，扩增获得PsSym7基因片段，该 基因片段长743bp。通过用GeneiousPro锄4．5．4进行在线分析比对，发现它与编码GARS蛋 tril 序列长度约为248个氨基酸，用GeneiousPro 4．5，4进行在线分析比对，发现它与豌豆GRAS 蛋白家族(网上登录号为CAH55769)的序列同源率达99．8％。 3，克隆了豌豆早期结瘤素基因PsSym35 Protril 4．5．4进行分析，该基因有 838bp，PsSym35down(CDS区域)长为3a99bp。用Geneious 克隆的PsSym35基因推导的蛋白质与公布的豌豆结瘤过程早期的蛋白(NCBI登录号 a岫37946)比对，同源率为98．7％。 4．将PsENODl24与PsLectin两个基因导入了烟草基因组 tabacum PsENODl2A与PsLectin两个基因导入烟草(Nicoriana 8个独立的卡那霉素抗性烟草株系，移栽后全部成活并开花结果。PCR检测初步确定 PsENODl24基因和psl基因已