重金属污染土壤微生物分子生态及对修复效应的影响.pdf

摘要 捅要 微生物作为土壤生态系统的重要组成成分，其活性和种群变化影响着土壤质量。土 壤微生物对重金属的适应性与耐性虽相当普遍，但有关其机理及定量描述适应性大小方 面的工作仍很缺乏。本项目拟采用PcR—DGGE、分子克隆、荧光定量PcR等生物技术 并结合传统微生物学方法研究野外实验条件下重金属污染土壤的微生物分子生态变化 规律，获得重金属污染下土壤微生物结构和功能组成，为重金属污染土壤生态系统的恢 复及土壤重金属的修复提供理论依据，主要结论有： (1)浙江富阳因铜矿冶炼而导致废水引灌和废气颗粒沉降引起的土壤cu、zn等 复合污染，因此我们在浙江富阳某铜冶炼厂附近建立铜污染土壤的修复示范基地，占地 Cu和zn不同提取态的．、浓度与微生物生物量和磷酸酶的活性呈负相关。对DGGE结果 分析得知距冶炼厂50m、200m、600m在微生物物种组成上差异显著。而且代表优势物 种的较亮的条带在数量和位置上有明显的不同。 (2)为了研究植物根际效应对微生物的影响，利用PCR—DGGE结合克隆与荧光 定量连用探讨海州香薷、三叶草和鸭趾草根际微生物群落组成。结果显示cu的浓度显 著的影响了植物生物量，尤其以三叶草最为明显，而海州香薷在cu处理为500 m班g 时其生物量显著高于鸭趾草与三叶草。随着重金属浓度的升高，根际土壤pH值明显下 降。随着添加土壤铜浓度的增加，未种植植物、cu敏感植物三叶草、鸭趾草根际微生 物群落结构多样性下降，但是当低于500 mg他g处理，cu耐性植物海州香薷根际微生物 多样性增加。通过条带回收、克隆测序的结果揭示了海州香薷根际微生物的种群主要以 d、B、Y撇D6口c据rf口、放线菌、cFB类群等构成，并构建了铜污染土壤植物根际微生 物的微生物群落组成基因文库。我们进一步对B。肋把D妇c研协进行荧光定量，发现未 种植植物、cu敏感植物三叶草、鸭趾草根际B．胁把口6Ⅱc招rf口的拷贝数下降。对于铜的 耐性植物海州香薷，随着重金属浓度的升高，其拷贝数是先增加后下降，铜的浓度200 mg，1(g处理下B—m把。妇cfP砌的拷贝数出现一个拐点。进一步表明了表明土壤微生物 在海州香薷对土壤铜的耐性中发挥着重要的作用。 (3)于海州香薷根际存在大量的铜耐性微生物，因此我们研究了海州香薷根际微 生物对土壤重金属活性的影响及植物对铜吸收的影响。从根际分离到的微生物增加了富 阳土壤水溶态cu、zn的活性。进一步的微生物抑制试验证实由于氨比西林(O．1mg昏1) 摘要 抑制了土壤微生物的活性，相比未添加抑制剂，菌株MSl2处理降低36％的土壤水溶态 cu的含量。将我们筛选的耐性微生物接种到海州香薷根际，研究发现耐性微生物能够 促进植物对重金属cu的吸收。菌株Ms2在能够显著促进植物吸收铜且相比其他菌株效 果最好，海州香薷地上和地下部分铜的浓度分别增加1．2倍、1．5倍。进一步的抑制试验 发现，证实由于微生物的活性促使cu向植物体内转运，氨比西林处理分别降低了海州 香薷地上部分24-44％、根中20．44％的积累量。 (4)海州香薷根际除了存在大量Cu的耐性微生物且在植物对铜耐性和吸收上起着 重要作用外，土壤还有一些硫氧化的功能性微生物，因此我们研究土壤中硫氧化功能性 微生物在重金属的活性中的作用。向土壤中添加硫磺后，反应前一个月土壤pH值基本 不变，30天后土壤酸度开始迅速下降，反应两个月后下降至4．5左右。添加硫磺后，土 壤pH值的下降是由于土壤中的soB作用而造成的。硫磺对土壤中重金属的活化有良好 的效果。土壤中添加硫代硫酸钠、亚硫酸钠与底物s作用缓慢作用的生物学机制不一样， 硫代硫酸钠增加土壤有效态重金属主要是物理化学的作用。添加硫磺后，铜草地上部和 根部铜、锌含量均有所增加。污染土种植的海州香薷根部和地上部植株铜含量增加了5．0 和2．5倍。硫磺处理改变了土壤中的微生物群落结构，并对s处理一个月后出现特异条 带进行克隆、测序分析所得微生物是与s氧化相关和从富含重金属的酸性环境获得的 菌。由于微生物的作用，S被氧化，降低土壤口H，提高土壤重金属的有效性。 (5)我们试验两种螯合剂柠檬酸和葡萄糖来研究其对植物修复的效果及对土壤微