重金属在土壤-生物界面相互作用的分子机制.pdf

摘要 土壤微生物是土壤中的活性胶体，它们比表面大带电荷，代谢活动旺盛。受到重 金属污染的土壤，往往富集多种耐重金属的真菌和细菌，微生物可通过多种作用方式 影响土壤重金属的活性。本论文从受重金属污染的土壤中筛选到一株具有较高铜锌耐 性的微生物，采用电镜、能谱、红外光谱和x．射线吸收光谱等现代分析技术并结合 传统的物理化学方法，阐明了恶臭假单胞菌CZl对Cu、Zn的吸附行为及其结合的分 子形态，并初步探讨了微生物．矿物．重金属相互作用机制，旨在为重金属污染土壤的 风险评价和生物修复提供理论依据。通过研究取得了以下主要结果： 从浙江诸暨哩浦铜矿废弃矿区铜耐性植物海州香薷根际土壤中分离到一株具有 rDNA 较高铜锌耐性的微生物，编号为CZl，根据形态学观察、生理生化特性和16S mM mM Cu或5 Zn， 序列同源性比对，鉴定为Pseudomonasputida。CZl可分别耐受3 对氨苄青霉素具有抗性，而对卡那霉素无抗性。重金属耐性实验发现固体培养基中最 低抑制浓度小于液体培养基中最低抑制浓度，而且Cu的毒性要大于Zn的毒性。在 含有27．7 Cu或26．0 Zn的无机盐液体培养基中，CZl对cu和zn的去除 mg／L mg／L 能力可分别达到87．2％和99．8％。尽管较低浓度的重金属会对微生物细胞造成一定程 度的损伤，但CZI依然表现出了较高的铜锌富集能力。 能力远大于死菌体，并且包括主动吸收和被动吸附两个过程，其中活菌体通过主动吸 解吸实验表明，O．1 M 收的过程。在0．01 实验设计尽可能降低实验误差的影响，发现CZl对cu2+、Zn2+的吸附符合亚稳态平 衡吸附理论。解吸实验结果表明菌体CZl吸附的Cu2+、Zn2+包括可逆吸附和不可逆 吸附两部分，并用数学方法进行了估算，该方法可以利用简单的吸附．解吸数据对可 逆吸附和不可逆吸附部分的分配系数进行定量描述。 红外光谱分析发现，酯化和酸预处理后的死茵体对Cu2+、Zn2+的吸附能力显著降 低，表明羧基官能团在结合重金属的过程中发挥着重要作用。x．射线近边结构谱 的结合形态，分别为59．O％和68．8％。Cu-组氨酸和CuCl类似络合物也占有一定比例， 而且活菌体中CuCI类似络合物含量明显高于死菌体，表明活菌体可能存在将Cu2+还 Cu-N／O键为主，配位数分别为4．0和3．8，键长均为1．94A。结合物理化学方法，从 分子水平上阐明了羧基是恶臭假单胞菌CZl结合重金属的主要官能团。 重金属和针铁矿都会影响微生物的存活能力，但是当微生物与针铁矿共同培养 时，降低了重金属对微生物的毒害作用，而且吸附态的金属离子具有相对较低的毒性。 当微生物与矿物的混合比例为1：1时，复合体可较大提高对金属离子的吸附能力。在 较低Cu2+、Zn2+浓度下，针铁矿和钠基蒙脱石含有较多与Cu2+结合的高亲和力位点， 但与Zn2+结合的较少；水钠锰矿中与Cu：+、Zn2+结合的高亲和力位点均多于微生物， 亲和力位点，在矿物．微生物复合体吸附金属离子的过程中，微生物的贡献率普遍较 高，甚至超过90％。通过透射电镜和x．射线能谱分析也发现，微生物细胞是矿物一微 吸附态的Cu2+、Zn2+解吸更有效，但活菌体和死茵体之间并无显著差异。不同矿物、 微生物一矿物复合体之间的解吸行为也不尽相同，恶臭假单胞菌CZl的加入降低了复 合体系中吸附态Cu2+、zn2+的解吸效率。 接种CZl后，提高了土壤中水溶态和可交换态Cu、Zn含量，而有机结合态Cu、 Zn含量则显著降低，说明CZl对污染土壤中的Cu、Zn具有较强的活化能力。经过 2周的培养，土壤中的碳源和氮源基本上可以维持微生物的正常生长，外源物质的加 入反而会降低土壤中水溶态Cu、Zn含量。柠檬酸、草酸和硫磺对土壤中水溶态Cu、 且在螫合剂和根际耐性微生物的联合作用下，这种活化能力会进一步增强，但微生物 后，土壤中Mn氧化物结合态和无定型Fe氧化物结合态Cu可转变为有机结合态Cu， 土壤中有机结合态含量的升高会在一定程度上提高重金属的生物可利用性。 关键词：恶臭假单胞菌CZl；重金属；矿物；耐性；吸附解吸；分子