雨生红球藻细胞化及虾青素的提取.pdf

雨生红球藻细胞转化及虾青素的提取 摘 要 虾青素具有很强的抗氧化性和清除自由基的能力，可有效防止组织、细胞和 DNA的氧化损伤，具有广泛的应用。雨生红球藻是目前公认的虾青素的最好生 物来源。雨生红球藻具有明显的生命周期，通过环境胁迫藻细胞由绿色游动细胞 转化为厚壁孢子并大量积累虾青素。本文以实验室保藏的一株雨生红球藻为藻 种，以虾青素含量为指标，首先通过中心组合实验(CCD)，对转化阶段的培养 基进行优化，然后将优化后的乙酸钠培养基中的虾青素含量与葡萄糖培养基中虾 青素含量进行对比，发现添加葡萄糖的培养基虾青素含量更高，因此选择葡萄糖 培养基作为最优培养基，成分为：葡萄糖：3g／L，K_N03：O．3g／L，KH2P04： O．03 g／L，MgS04：0．1g／L，CaCl2：0．08g／L，Fe—EDTA：100ul／L，微量元素： 100“l／L，虾青素含量为16．9754-0．6825mg／L，比乙酸钠最优转化培养基中的虾青 素含量高53．67％。而后，通过Box—Behnken对转化条件进行优化，得到最优转化 条件为：转化温度29．92℃，转化光照7203．95 Ix，转化时间10．6 10，虾青 d，pH 素含量达33．79644-1．5561 mg·L～，是未优化转化条件时的1．99倍。最后，对装液 量和转化时间对虾青素含量的交互影响进行了研究，发现：减少装液量，增大藻 液的相对表面积，可有效提高转化效率，缩短转化时间，提高虾青素含量。在装 液量49。491lml，转化时间为10．3577d时，虾青素含量达36．9138 ml mg／L，LI,100 装液量情况下转化得到的虾青素含量高10％左右。 完成上述实验后，针对红光对雨生红球藻生长的影响和蓝光对于转化的影响 进行了探讨。研究发现：生长最适光照为：白光为主，红光为辅，白光：红光(2： 1)2500lx，所得藻干重为0．7228+0．0301 g／L，比白光照射情况下高6．3％。最适 lx)+白光(6000．7000 转化光照为：蓝光(2000 Ix)，虾青素含量达38．442+1．6418 mg／L，比白光转化情况下高14．9％左右，且加入蓝光后，藻细胞变红的时间明显 缩短，转化9d即可得最高虾青素含量，比白光照射情况下约提前1．6d，可见蓝 光对虾青素积累的促进作用较强，应用于生产上可有效节约成本。若进一步提高 蓝光比例可能会有更好的效果。 V 为了找到合适的保种方法，对继代保藏、固定化保藏和低温保减三种常见 的藻种保藏方法进行了研究，发现低浓度(5％)液体保藏简便易行效果较好， d～，适宜在科研实践中使用；固定化保藏储存方便，保藏4个月后存活率和相对 d～，此方法随保藏时间延 生长速率常数分别为：30．51+1．3285％和O．2641+0．0115 长藻细胞死亡速率减慢，适合长期保藏；10％DMSO做保护剂，．20℃低温保藏 d一， 时，存活率和相对生长速率常数分别为42．27+1．8759％和0．155+0．0063 20％DMSO做保护剂一40℃保藏时存活率和相对生长速率常数分别为 49．05+2．0343％和0．175士O．0065d～，此种方法小易染菌、藻细胞性状稳定。 通过对雨生红球藻中虾青素提取的初步研究，得到最佳破壁条件为：高速分 Hz，23000 min；其破壁率达96士3．9351％左右，破 散均质机频率50 rpm，破壁6 壁率高，处理量较大，适用于生产。