鸡mx基因克隆表达分析.pdfVIP

摘 要 Mx蛋白是在IFN诱导下产生的抗病毒蛋白质，禽类的Mx蛋白具有抵抗禽流感病毒及水疱 性口炎病毒(VsV)的功能，由于禽类是禽流感的自然宿主，因此对禽类Mx蛋白基因进行研究 (White 白基因全K并对基冈组结构进行分析；同时进行了诱导条件下两个不同品种Mx蛋白基因表达差 异的研究及原核表达载体的优化及表达研究。所得结果如下： 点氨基酸对应的2216碱基突变的基冈型及基冈频率在两个品种中存在显著差异。其中，白来航等 种间，该位点的基因型分布存在极显著的差异，白来航AA基冈型的频率显著高于北京油鸡。两 个群体在P2．SSCP位点上基因型和基因频率都处于Hardy—Weinberg平衡状态。 由丁对2216突变位点进行PCR．RFLP研究时无合适的限制性核酸内切酶，为方便进行突变 位点的检测，实验中设计错配碱基产生合适的酶切位点，建立了一套快速检测Mx基因2216突变 位点的检测体系，结果稳定可靠。 结果预测的氨基酸显示631位是Asn，可以作为转基冈的外源DNA序列进行转基因研究。 利用北京油鸡和自来航血液基因组DNA分别获得了Mx基冈的14个外显子，与利用cDNA 序列预测结果一致，其中编码区包含13个外显子，exonl为非编码的。14个外显子大小分别为： 对北京油鸡和白来航鸡胚成纤维细胞进行诱导表达的研究时，发现不同浓度诱导剂(polyl：C) 诱导时，白来航和北京油鸡Mx蛋白基因表达在两个不同的品种间存在明显差异(半定量)，利用 实时定量PCR(real．timePCR)对白来航Mx蛋白基因表达情况进行研究，获得的结果与半定量 结果相同，具体机制需要研究探讨。 通过对获得的Mr蛋白基冈在大肠杆菌中表达时稀有密码子和mRNA翻译起始区二级结构的 分析，构建了四种重组表达菌。经优化稀有密码子和翻译起始区的二级结构，在pETRTMx， 白基冈全编码区ORF的重组菌。实验结果也说明选择合适的表达载体和宿主菌对外源基因的表 达和获得较高的表达量在原核表达选择设计中很重要。 关键词：鸡，Mx基因，克隆，SNP，实时定量PCR，表达 Abstract TheMx isa75KDaantiviral induccdIFNandsomeviruses．Oneformoftheavian protein protein by Mx was discoveredtohaveantiviral influenzaandvesicular protein activity(avian stomatitis)．Because birds arenaturalhostsofavian ofchickenMx andits ateof influenza，the study protein encodinggenes the ChineselocalbreedandWhite significance．In presentstudy,Beijing-you(BJⅥ，a leghorns(WLH)， astandard breedwereselected．GEDbetweenBJYandWLH PCR-SSCPand egg-type analysis using Mx PCR-RFI卫the cDNAofchickenwasobtainedandthe structureofMxwasalso full—length genome Mx WLH thedifferencial of underdifferentinducem