鸡pirnas克隆、表达及体外抑制piwi基因表达的研究.pdfVIP

鸡piRNAs的克隆、表达及体外抑制Piwi 基因表达的研究 研究生：张颖 IIII I IIIII I I IIIII I UI 导师：常国斌副教授 Y22587…3—5 专业：动物遗传育种与繁殖 (杨州大学动物科学与桔术学院，江苏杨州225009) 摘要 RNA)是主要富集不同种类动物生殖系中的一类内源性小 piRNAs(Piwi．interacting 分子RNA，Piwi基因主要存在于生殖细胞中，在生殖系干细胞的维持和精子发生方面发 的结构共性、起源、表达规律和功能以及与Piwi基因之间的作用机制一直不详。本研究 23,--,39 不同序列并采用Real．Time qPCR技术分析了中国地方鸡种如皋黄鸡和引进隐性白羽鸡的 2000脂质体法瞬时转染鸡PGCs，运用Real．Time 采用Lipofectamine‘oM qPCR技术检测转 染24h、48h和72 失的机理提供基础依据，也为禽类小分子RNA及其结合蛋白的深入研究和实际应用积累 基础资料。结果表明： 中的分布特征同其它物种一样，均具有不均匀性和基因间区偏爱性；二级结构预测，发现 鸡piRNAs具有与miRNAs不同的独特的茎．环结构。 种的公、母鸡的所有组织中的表达量均是相对最低，且到12周龄时均趋向一致的水平； 在8周龄达到最高峰，在隐性白羽公鸡中的表达量相对较高，而在如皋黄鸡、隐性白羽母 鸡中均呈现中度表达水平。 对鸡Piwi表达在不同时间均有不同程度的抑制作用且抑制效果与siRNA序列相对于靶基 因的位置和转染时间长短相关，24h后便可检测出明显抑制，48h达到高峰，72h后开始 减弱。在3个不同的时间点，空白对照组与阴性对照组相比均无显著性差异(胗0．05)， 性siRNAs进行比较发现siR．3沉默效率最高。综合以上数据表明，转染48h后的siR．3 序列靶向抑制Piwi基因表达效率最高，可用于后续实验的研究。 4．Real．Time 呈现正相关，而与CDH可能无明显相关。 关键词：piRNAs；鸡；Piwi；PGCs；RNAi；Real．TimeqPCR and of inchickenand of piRNAs repression Cloningexpression invitro Piwi RNAinterference by MD candidate：YingZhang Prof．Guobin Chang Supervisor：Associate or：Animal and Maj genetics，breedingreproduction and ofAnimalScience (College Technology,Yangzhou Abstract