FSH和17β-雌二醇联合作用对仔猪睾丸 支持细胞Skp2表达的调节.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(11):2347-2354 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.11.018 FSH 和17β-雌二醇联合作用对仔猪睾丸 支持细胞Skp2 表达的调节 张国升，左 敬，甘 瑞，朱峰伟，孙 燕，王鲜忠，张家骅 （西南大学动物科技学院/重庆市牧草与草食家畜重点实验室，重庆 400716 ） 摘要：【目的】确定FSH和雌激素联合作用是否可通过ERK1/2 级联调节培养条件下未成熟仔猪睾丸支持细胞中 Skp2 的表达。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料，通过添加各种信号通路的抑制剂，应用Western blotting和实时荧光定量PCR检测Skp2 蛋白、mRNA的表达。【结果】FSH （50 ng·mL-1 -9 -1 ）和17β-雌二醇 （10 mol·L ） 联合作用时以时间依赖的方式促进了Skp2 蛋白和mRNA的表达（ P＜0.05），这一作用在30 min时到达高峰；FSH （50 -1 -9 -1 ng·mL ）、17β-雌二醇 （10 mol·L ）和forskolin单独作用均促进了Skp2 蛋白和mRNA的表达 （P＜0.05），FSH （50 -1 -9 -1 -9 -1 ng·mL ）和 17β-雌二醇 （10 mol·L ）联合作用对Skp2 表达的影响与FSH或 17β-雌二醇 （10 mol·L ）单独作 用无显著差异 （ 2+ P≥0.05），而环磷酸腺苷抑制剂 （Rp-cAMP）、蛋白激酶A （PKA）抑制剂（H-89）、L-Ca 离子通道 抑制剂（verapamil）和ERK1/2 抑制剂（U0126）单独作用时对Skp2 蛋白和mRNA的表达与空白对照相比无显著影响 （ -1 -9 -1 P＞0.05），但都抑制了FSH （50 ng·mL ）与 17β-雌二醇 （10 mol·L ）联合作用对Skp2 蛋白和mRNA表达的影 响 （ P＜0.05）。H-89、verapamil单独作用对ERK1/2 （细胞外信号调节的蛋白激酶1/2）活性没有影响，但降低了 FSH （50 ng·mL-1 -9 -1 ）和 17β-雌二醇 （10 mol·L ）联合作用对ERK1/2 活性的影响。【结论】 FSH与 17β-雌二醇联 合作用激活了cAMP-PKA级联和Ca2+ 2+ 内流，而PKA和Ca 内流又通过影响ERK1/2 的活性进而影响Skp2 的表达。 关键词：FSH; 17 β-雌二醇; 睾丸支持细胞; S 期激酶相关蛋白2; 细胞外信号调节的蛋白激酶1/2