GPX5在成年绵羊附睾中的表达与蛋白定位.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(24):4989-4995 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.24.013 GPX5在成年绵羊附睾中的表达与蛋白定位 栗瑞兰，张 通，范晓梅，欧阳效晴，张春强，曹俊伟，张家新 （内蒙古自治区动物遗传育种与繁殖重点实验室/ 内蒙古农业大学动物科学学院，呼和浩特 010018 ） 摘要：【目的】研究谷胱甘肽过氧化物酶-5（glutathione peroxidase type-5, GPX5）在成年绵羊附睾的表 达特征以及 GPX5 蛋白在附睾中的定位，为绵羊精子在附睾中抗氧化机制的研究提供理论依据。【方法】采取年龄 相近的成年蒙古绵羊的附睾、睾丸和输精管。每一只公羊的附睾分别按照附睾头、附睾体和附睾尾进行分割。样 品保存于-80 ℃冰箱，采用实时荧光定量PCR和Western blotting的方法，对成年绵羊的附睾、睾丸和输精管的 GPX5 表达量进行分析。将新鲜的组织样品各部分切取适合大小浸泡于4%多聚甲醛溶液中24h，按照石蜡切片的方 法制作组织切片。用 GPX5 特异性抗体孵育组织切片，利用 DAB 显色试剂盒对阳性信号进行标记。【结果】实时荧 光定量PCR结果显示，成年绵羊附睾头GPX5基因的表达量极显著高于附睾体和附睾尾（P ＜0.01），而在输精管和 睾丸几乎不表达。Western blotting的结果显示，GPX5蛋白在成年绵羊附睾头高表达，在附睾体和附睾尾有微量 蛋白存在，睾丸和输精管中未发现GPX5蛋白。这表明GPX5主要在成年绵羊附睾头表达；经过免疫组化染色分析， GPX5蛋白主要位于附睾头上皮细胞质以及静纤毛，附睾体和附睾尾中的GPX5蛋白主要集中在静纤毛。在附睾头、 附睾体和附睾尾中的精子上以及附睾腔都可以观察到 GPX5 蛋白，表明 GPX5 蛋白从附睾上皮分泌到附睾腔中，随 着精子在附睾中的运输与精子结合。【结论】在成年绵羊附睾中，GPX5 主要由附睾头上皮细胞合成和分泌，在附 睾管腔中与精子结合，为精子功能的正常发挥提供保护。 关键词：绵羊；附睾；GPX5；基因表达；蛋白定位 Study on Expression of Glutathione Peroxidase type-5 (GPX5) and Protein Localization in Epididymis of Adult Sheep LI Rui-lan, ZHANG Tong, FAN Xiao-mei, OU YANG Xiao-qing, ZHANG Chun-qiang, CAO Jun-wei, ZHANG Jia-xin (Key Laboratory of Animal Genetics ，Breeding and Reproduction of Inner Mongolia Autonomous Region/The College of Animal Science, Inner Mongolia Agricultural University ，Hohhot 010018) Abstract: 【Objective 】 The objective of this study was to investigate the expression pattern of GPX5 （Glutathione peroxidase type-5 ）and GPX5 protein localization in adult sheep epididymis to provide a theoretical basis for studying antioxidative mechanisms of sperm in sheep epididymis. 【Method 】 Epididymis, testis and deferent duct of ad