蚕用益生芽孢杆菌SWL-19的筛选鉴定及其对肠道菌群多样性的影响.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(9):1845-1853 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.09.18 蚕用益生芽孢杆菌SWL-19的筛选鉴定及其 对肠道菌群多样性的影响 1 2 1 1 1 1 李冠楠 ，夏雪娟 ，SENDEGEYA Parfait ，何石宝 ，郭东东 ，朱 勇 1 2 （西南大学生物技术学院，重庆 400716 ； 西南大学食品科学学院，重庆 400716 ） 摘要：【目的】筛选对家蚕（Bombyx mori ）具有益生作用的芽孢杆菌，改善家蚕肠道微环境，促进蚕业生产 的发展。【方法】采用高温选育法对家蚕肠道内的芽孢杆菌进行初筛；以产胞外消化酶（蛋白酶、脂肪酶、纤维素 酶和淀粉酶）及能在肠道定殖为基础，结合溶血试验、抗生素药敏试验和产消化酶能力大小等对芽孢杆菌进行复 筛。通过形态、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定菌种，再利用变性梯度凝胶电泳（DGGE）技术检测其在家 蚕肠道内定殖情况及其对肠道内微生物菌群多样性的影响。【结果】共从57株细菌中筛选出两株能同时产蛋白酶、 脂肪酶、纤维素酶和淀粉酶且不产生溶血现象的芽孢杆菌SWL-17和SWL-19。14种抗生素药敏纸片检测结果表明， 二者对绝大多数抗生素敏感，且敏感程度基本相同。除SWL-19不能利用蔗糖发酵外，两个株菌的革兰氏染色、芽 孢染色、产酸产气、柠檬酸利用、葡萄糖发酵、硝酸盐还原和 V-P 等生理生化特性均相同。二者生长速度相同， 但菌落形态特征差异较大。SWL-17 的菌落形态为淡黄色，圆形隆起，表面光滑湿润，边缘整齐，而 SWL-19 的菌 落形态为乳白色不透明，表面扁平干燥，边缘不整齐。SWL-17产蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶和淀粉酶的能力分别 为（1.62±0.04）、（2.12±0.11）、（1.87±0.03）和（1.43±0.03），SWL-19的产酶能力分别为（2.91±0.05）、 （2.43±0.04）、（3.24±0.12）和（3.48±0.10）。因此 SWL-19 具有较高的产消化酶能力，且除脂肪酶外，其产 蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶的能力均显著性高于 SWL-17（P ＜0.05）。细菌 16S rDNA 序列比对和系统发育分析表 明SWL-17和SWL-19分别为芽孢杆菌（Bacillus sp.）和枯草芽孢杆菌(B.subtilis)，且 SWL-19具有更清楚的遗 传背景，适于进行后续试验。进一步 DGGE 试验结果表明，自然条件下家蚕肠道内的优势菌群为肠球菌属 (Enterococcus)细菌，而外源性添加菌株SWL-19后能使家蚕肠道内的芽孢杆菌属和肠杆菌属细菌成为优势菌群， 说明芽孢杆菌 SWL-19 能在家蚕肠道内定殖，并且能改变家蚕肠道内微生物菌群的结构和多样性。【结论】家蚕益 生芽孢杆菌的筛选为研发蚕用复合微生态制剂提供菌株资源，在蚕业生产上具有重要的应用价值。 关键词：益生菌；筛选；家蚕；肠道菌群；芽孢杆菌；巢式PCR-DGGE Screening and Identification of Silkworm Probiotic Bacillus SWL-19 and Its Effect on Intestinal Microflora Diversity 1 2 1 1 1 1 LI Guan-nan , XIA Xue-juan , SENDEGEYA Parfait , HE Shi-bao