灰葡萄孢犬尿氨酸单氧酶基因BcKMO调控病菌致病力的机制分析.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(16):3167-3173 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.16.005 灰葡萄孢犬尿氨酸单氧酶基因BcKMO 调控 病菌致病力的机制分析 李培芬，赵福鑫，董丽萍，郑会欣，赵 斌，韩建民，邢继红，董金皋 （河北农业大学/真菌毒素与植物分子病理学实验室，河北保定 071001 ） 摘要： 【目的】揭示灰葡萄孢犬尿氨酸单氧酶基因BcKMO （kynurenine 3-monooxygenase ）调控病菌致病力的 机制，阐明灰葡萄孢致病的分子机理。【方法】利用DNS 和Hoffman 方法，对BcKMO 的T-DNA 插入突变体BCG183 和 回复突变体（BCG183/BcKMO ）的多聚半乳糖醛酸酶（PMG ）、果胶酶（PG ）、纤维素酶（Cx ）、多聚半乳糖醛酸反式 消除酶（PGTE ）和果胶甲基反式消除酶（PMTE ）的活性进行分析；提取灰葡萄孢野生型和BCG183、BCG183/BcKMO 突 变体的粗毒素并进行生物活性测定；利用溴百里酚蓝显色试验，对突变体BCG183 和BCG183/BcKMO 的产酸能力进行 分析；利用洋葱表皮穿透试验，检测突变体BCG183 和BCG183/BcKMO 的穿透能力；利用real-time PCR 技术，检测 突变体BCG183和BCG183/BcKMO 中已知致病相关基因腺苷酸环化酶编码基因Bac、异源三聚体G-蛋白G亚基基因Bcg2 和Bcg3、蛋白激酶调节亚基基因PkaR、MAP 激酶编码基因Bmp1 和Sak1、MAP 激酶Bmp3 和BcSak1 下游的靶基因Bcreg1、 TCHK-MAPK 信号途径基因Bos1、亲环蛋白A 编码基因Bcp1、小G 蛋白基因Ras2、多聚半乳糖醛酸酶基因Bcpg1 和超 氧化物歧化酶基因Sod1 的表达水平。【结果】突变体BCG183 中的PMG 和PG 的酶活性较野生型和回复突变体明显增 强，CX、PGTE 和PMTE 的酶活性与野生型和回复突变体没有明显差别；突变体BCG183 的毒素活性较野生型和回复突 变体明显增强；突变体BCG183 的产酸能力较野生型和回复突变体明显减弱；突变体BCG183 能够穿透洋葱表皮，在 培养基上形成菌落，与野生型和回复突变体没有明显差别；突变体BCG183 中已知致病相关基因Bac、Bcg2、Bcg3、 PkaR、Bmp1、Sak1、Bcreg1、Bos1、Bcp1、Ras2、Bcpg1 和Sod1 的表达水平明显强于野生型和回复突变体。【结论】 灰葡萄孢BcKMO 通过调控病菌的胞壁降解酶活性、毒素活性、产酸能力、致病相关基因的表达而影响病菌的致病力。 关键词：灰葡萄孢；BcKMO；突变体；致病力 Mechanism Analysis of Kynurenine 3-monooxygenase Gene BcKMO in Regulation of Pathogenicity in Botrytis cinerea LI Pei-fen, ZHAO Fu-xin, DONG Li-ping, ZHENG Hui-xin, ZHAO Bin, HAN Jian-min, XING Ji-hong, DONG Jin-gao (Agricultural University of Hebei/ Laboratory of Mycotoxin and Molecular Plant Pathology, Baoding 071001, Hebei) Abstract: 【Objective 】The objective of this study is to reveal the molecular mechanism of kynurenine 3-monooxygenase gene B