农杆菌介导的CMV侵染性克隆及2b缺失突变体构建.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(14):3060-3068 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.14.024 农杆菌介导的CMV 侵染性克隆及2b 缺失突变体构建 姚 敏，张天奇，田志超，王源超，陶小荣 （南京农业大学植物保护学院，南京210095 ） 摘要：【目的】构建农杆菌介导的黄瓜花叶病毒（CMV）侵染性克隆，测试缺失CMV 2b基因后的侵染表型。【方 法】首先将pHST40 上的1x35S-MCS-HDVRZ-NOS转移到中间载体pBluescript SK II上，用pRTL2 上的2x35S替换中间 载体上的 1x35S增强子序列，然后将2x35S-MCS-HDVRZ-NOS转移到微型植物表达载体pCB301，构建适用于病毒侵染 性克隆和农杆菌浸润的植物表达载体，在此基础上将CMV Fny株系的全长cDNA基因组构建到该植物表达载体的 2x35S启动子和HDV核酶之间，通过农杆菌浸润在本氏烟中瞬时表达产生具有侵染活性的CMV基因组RNA，进一步缺 失 2b来测试该缺失突变体侵染植物的表型。【结果】构建了一个用于构建RNA病毒侵染性克隆的植物表达载体 pCB301-2x35S-MCS-HDVRZ-NOS，将CMV Fny的3 条基因组分别构建在这个植物表达载体上后，通过农杆菌浸润本氏 烟可诱导产生曲叶、花叶和矮化等症状，进一步对2b进行缺失，表明该缺失突变体接种本氏烟早期具有微弱曲叶 症状，中后期表现无症，RT-PCR检测表明CMV Fny 2b缺失突变体能够系统侵染本氏烟。【结论】在改造的微型植物 表达载体pCB301-2x35S-MCS-HDVRZ-NOS上构建了CMV的侵染性克隆，构建的侵染性克隆通过农杆菌介导可快速高效 侵染植物。2b对CMV Fny在本氏烟中的症状发展具有重要作用，但 2b对其在本氏烟上的复制和系统侵染并不是必 需。 关键词：黄瓜花叶病毒；侵染性克隆；农杆菌浸润；2b 缺失突变体 Construction of Agrobacterium-mediated Cucumber mosaic virus Infectious cDNA Clones and 2b Deletion Viral Vector YAO Min, ZHANG Tian-qi, TIAN Zhi-chao, WANG Yuan-chao, TAO Xiao-rong （College of Plant Protection, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095 ） Abstract: 【Objective 】 The objective of this study is to generate the Agrobacterium-mediated infectious cDNA clones of Cucumber mosaic virus and investigate the phenotype of 2b deletion mutant in Nicotiana benthamiana . 【Method 】 1x35S-MCS-HDVRZ -NOS cassette was transferred from pHST40 into pBluescrpt SK II and 2x35S enhancer from pRTL2 was used to replace 1x35S on pBluescrpt SK II, then the whole 2x35S-MCS-HDVRZ -NOS cassette was transferred into mini binary vector pCB301 to generate pCB301-2x35S-MCS-HDVRZ -NOS. The full length cDNAs of CMV Fny were inse