农杆菌介导苹果炭疽病菌的遗传转化及转化子鉴定.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(9):1799-1807 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.09.007 农杆菌介导苹果炭疽病菌的遗传转化及转化子鉴定 1 1, 2 3 1, 2 1, 2 1, 2 王海艳 ，李保华 ，张清明 ，李桂舫 ，董向丽 ，王彩霞 1 2 （青岛农业大学农学与植物保护学院，山东青岛 266109 ； 山东省植物病虫害综合防控重点实验室，山东青岛 266109 ； 3 青岛农业大学化学与药学院，山东青岛 266109 ） 摘要：【目的】优化农杆菌（Agrobacterium tumefaciens ）介导转化苹果炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）的技术体系，并对转化子进行筛选鉴定，比较其生物学特性和致病性差异。【方法】以苹果炭 疽病菌LXS010101 分生孢子为转化受体，利用携带重组双元载体的农杆菌进行转化；对获得的转化子进行遗传稳 定性测定、PCR 检测及Southern blot 分析；选取一定数量的转化子，比较其菌落形态、生长速率及分生孢子发 育等主要生物学性状及致病性的差异。【结果】苹果炭疽病菌的最优转化体系为：病菌分生孢子悬浮液浓度1×105 -1 个/mL，共培养温度和时间分别为22℃和24 h，共培养基中添加200 μmol·mL 乙酰丁香酮，其转化效率达到1× 5 10 个孢子可获得439 个转化子。随机选取30 个转化子进行鉴定，发现T-DNA 已整合进炭疽病菌基因组中，在所 检测的转化子中都是以单拷贝的形式整合，且能够稳定遗传。与野生型菌株相比，转化子的菌落形态没有发生明 显变化，但23.33%的菌株生长速率显著减低；转化子ATJ-3 和ATJ-15 不能产生分生孢子，在28 个产孢菌株中， 分生孢子萌发率显著减低的菌株占39.29%，附着胞形成比例显著减低和形态异常的菌株占25.00%。致病性测定结 果显示，11 个转化子的致病力显著降低，其中菌株ATJ-19 完全丧失致病能力。【结论】优化的苹果炭疽病菌遗传 转化技术体系，可用于炭疽病菌致病相关基因的克隆及致病分子机理的研究。 关键词：苹果炭疽病菌；遗传转化；转化子鉴定；致病性 Transformation of Agrobacterium tumefaciens-Mediated Colletotrichum gloeosporioides and Identification of Transformants 1 1, 2 3 1, 2 1, 2 1,2 WANG Hai-yan , LI Bao-hua , ZHANG Qing-ming , LI Gui-fang , DONG Xiang-li , WANG Cai-xia 1 2 ( College of Agronomy and Plant Protection, Qingdao Agricultural Un