苹果MdMYB9、MdMYB11表达及其蛋白互作分析.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(11):2208-2216 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.11.012 苹果 MdMYB9、MdMYB11 表达及其蛋白互作分析 1,2 1 2 2 2 1 安秀红 ，张修德 ，陈可钦 ，刘肖娟 ，郝玉金 ，程存刚 1 2 （中国农业科学院果树研究所/农业部园艺作物种质资源利用重点实验室，辽宁兴城 125100 ； 山东农业大学园艺科学与工程学院/作物生物学 国家重点实验室，山东泰安 271018 ） 摘要：【目的】克隆苹果( Malus domestica)中的 TT2 同源基因MdMYB9 和 MdMYB11,分析它们的序列特征，并 对这两个基因在不同组织器官及光诱导条件下的表达特性及蛋白互作进行分析，为进一步解析这两个基因的功能 奠定基础。【方法】采用同源克隆的方法分离得到MdMYB9 和 MdMYB11；利用DNAMAN软件对这两个蛋白的分子量、 等电点等进行预测及对氨基酸序列进行分析，同时利用MEGA4.0软件构建这两个蛋白与拟南芥R2R3 家族MYB蛋白 的系统进化树；利用定量 PCR 检测这两个基因在不同组织器官、不同发育时期苹果果皮及种子和光照处理条件下 的表达特性；利用酵母双杂交检测这两个 MYB 蛋白与花青苷合成相关蛋白 MdbHLH33 之间的互作关系。【结果】序 列分析显示，MdMYB9 开放阅读框长度为 873 bp，编码 290 个氨基酸残基，与拟南芥 TT2 序列同源性为 38.13%； MdMYB11 开放阅读框为861 bp，编码286个氨基酸残基，与TT2同源性为32.44%；蛋白结构分析显示，MdMYB9和 MdMYB11蛋白的N端都含有保守的R2R3功能域；进化树分析显示，这两个MYB蛋白都与拟南芥原花青苷合成相关 蛋白TT2聚在同一个分支；荧光定量结果表明，MdMYB9 和 MdMYB11 在苹果根、茎、叶和花中均有表达，但各器官 中表达水平存在差异；同时，这两个基因在不同发育时期的种子及果皮中都有表达，其中均在发育中期表达水平 最高；此外，光照诱导条件下 MdMYB9 和 MdMYB11 的表达变化无明显差异。酵母双杂交结果显示，MdMYB9和MdMYB11 均能够与花青苷合成相关蛋白 MdbHLH33 相互作用。【结论】苹果MdMYB9 和 MdMYB11 属于 R2R3 类 MYB 蛋白，在不 同组织器官及不同发育时期的果皮和种子中都有表达，并与MdbHLH33 蛋白相互作用。 关键词：苹果；原花青苷；MdMYB9；MdMYB11；表达分析；酵母双杂交 Expression and Protein Interaction Analysis of MdMYB9 and MdMYB11 in Apple 1,2 1 2 2 2 1 AN Xiu-hong , ZHANG Xiu-de , CHEN Ke-qin , LIU Xiao-juan , HAO Yu-jin , CHENG Cun-gang 1 ( Institute of Pomology, Chinese Academy of Agricultual Sciences/K