橡胶树转录因子HbERF1的克隆与功能分析.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(8): 1622-1633 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.08.018 橡胶树转录因子HbERF1 的克隆与功能分析 1 1,2 1 1 1 1 1 安泽伟 ，谢黎黎 ，王其同 ，李雅超 ，程 汉 ，胡彦师 ，黄华孙 1 2 （中国热带农业科学院橡胶研究所/ 国家橡胶树育种中心，海南儋州 571737； 广东农垦热带作物科学研究所，广东化州 525145 ） 摘要：【目的】克隆橡胶树转录因子HbERF1，分析其在橡胶树中响应非生物胁迫的表达模式，并通过在拟南 芥中过表达鉴定其生物学功能，为橡胶树抗逆育种提供基因储备。【方法】利用RACE 技术从巴西橡胶树中克隆到 HbERF1 全长序列，通过qRT-PCR 技术分析其在非生物胁迫下的时空表达特性；通过农杆菌介导法转化拟南芥，利 用Southern 杂交和qRT-PCR 技术对过表达植株进行鉴定，并分析过表达植株在干旱、高盐和PEG 等胁迫条件下的 表型及相关基因的表达特性，验证HbERF1 的生物学功能。【结果】橡胶树转录因子HbERF1 没有内含子，GenBank 登录号为JQ914647，cDNA 序列全长为 1 178 bp，包括62 bp 的5非编码区、474 bp 的3非编码区和642 bp 的 开放阅读框。开放阅读框编码一条213 个氨基酸组成的多肽，该蛋白具有一个保守的AP2 结构域和一个EAR 基序。 系统进化分析表明，HbERF1 属于AP2/ERF 家族中ERF 亚族的B-1 类，与蓖麻RcERF、杨树PtERF46、拟南芥AtERF4 的一致性最高，分别为 72%、62%和61%。qRT-PCR 分析表明，HbERF1 在橡胶树叶片和树皮中均能响应高盐、干旱 和PEG 胁迫，基因的表达在叶片中受ABA、MeJA 的抑制，而在树皮中则受ABA、MeJA 和SA 的抑制。在高盐和PEG 胁迫下，叶片中的HbERF1 在处理前期（≤8 h ）表达水平都低于对照，而树皮中的HbERF1 在胁迫4 h 时就受到强 烈诱导。在干旱胁迫下，随着干旱程度的增加，HbERF1 在叶片和树皮中表达水平持续增加，且在树皮中的表达要 高于叶片中的表达。HbERF1 的过表达提高了拟南芥的抗旱性、耐盐性和耐PEG 胁迫的能力，并抑制了乙烯受体基 因AtETR1 和AtERS1 的表达。在过表达植株中，AtETR1 和AtERS1 的表达水平分别比野生型中的降低了 19 倍和9 倍，差异极显著（P＜0.01）。在高盐胁迫下，过表达植株中AtRD22 和AtRD29A 的表达水平持续上升，且上调幅度 -1 高于WT，分别为对照的115倍和100倍；在20% PEG胁迫下，AtRD22和AtRD29A 的表达都受到诱导。用300 mmol·L NaCl 浇灌拟南芥，处理15 d 后，野生型拟南芥的叶片几乎全部萎蔫白化，而过表达株系S1 仅有少数叶片萎蔫白化。 用20% PEG6000 水溶液浇灌拟南芥，处理 15 d 后，过表达株系S1 生长正常，已进入生殖生长，而野生型植株仍 保持在营养生长阶段，生殖生长被延迟，且部分叶片出现脱水现象。停止浇水 2 周后，野生型拟南芥植株叶片枯 萎程度高于过表达植株，复水1 周后野生型植株的存活率仅为 35.0%，而过表达植株的存活率则高达95.0%。【结 论】HbERF1 参与了橡胶树的ABA、JA、SA 和ETH 信号途径，是ETH 信号的正调控因子，对提高橡胶树的耐旱性具 有积极作用。 关键词：巴西橡胶树；转录因子；非生物胁迫；ERF Mol