致病杆菌cb4菌株抑菌作用及抗菌物质的分离与纯化.pdfVIP

摘 要 致病杆菌CB43菌株 (Xenorhabdussp.)是中国农业科学院环境与可持续发展研 究所从采自我国东北地区的昆虫病原线虫新种一拟双角斯氏线虫 (Steinernerra ceratophorum)肠道内分离的菌株，属于肠杆菌科 (Enterobacteriaceae)致病杆菌 属 (XenorhabdusThomasandPoinar)。生理生化特性以及16srRNA分析发现，该菌 株与致病杆菌属其它己描述的种存在较大差异，可能为一新种。该菌株对多种植物病 原真菌尤其是番茄灰霉病菌具有较强的抑制活性，研究该菌的抑菌作用机理，分离纯 化其抗菌活性成份，对研制拥有自主知识产权的新型生物农药具有重要指导意义。 本文研究了CB43菌株代谢物对番茄灰霉病菌的抑制作用及抑菌作用机理，测定了 CB43菌株抗菌代谢产物的理化性质，利用大孔吸附树脂和离子交换层析技术进行了抗 菌物质的分离与纯化，主要结果如下: 1.筛选出对番茄灰霉病菌具有强烈抑制作用的CB43菌株。CB43菌株代谢产物 对灰葡萄抱菌丝生长有较强的抑制作用，125mL/L发酵液就能完全抑制菌丝的生长， 并具有杀死作用。62.5mL/L的发酵液72h后菌丝抑制率仍达83.35%0 2 研究了CB43菌株代谢物的抗菌作用机理.20mL/L的发酵液处理灰葡萄袍菌 丝悬浮液，能引起菌丝畸形，异常分支、粗短，甚至原生质外渗。CB43发酵液对灰 葡萄抱菌分生抱子有杀死和抑制萌发作用，500^-62.5mL/L的发酵液处理16h后， 抱子萌发抑制率达88.1%-v97.91%e 3.确定了以枯草芽抱杆菌代替番茄灰霉病菌作为抗菌物质分离提取过程中的指 示菌。 4 测定了CB43菌株抗菌代谢产物在不同pH及温度组合下的稳定性，明确了抗 菌物质在25C,80℃和一20℃条件下，2h-48h范围内，pH为2^12之间，抑菌活性没 有显著降低。说明发酵液在不同pH和不同温度下均比较稳定。 5.测定了抗菌物质的极性和带电荷性。纸层析和纸电泳结果表明发酵液中主要 抗菌物质为水溶性、极性比较强的两性物质。 6.筛选出对抗菌物质吸附效率较高的大孔吸附树脂H103，对抗菌物质的吸附率 达90%以上;确定了最佳上样流速为5mL/min，最佳洗脱溶剂为40%的乙醇溶液内加 0.Olmol/L的HC1. 7.筛选出适合纯化抗菌物质的110弱酸树脂;确定了适合纯化的分步洗脱技术 和方法，用。2mo1/L-1.8moULNH4CL梯度洗脱能将抗菌物质分成3个主要组分。 通过紫外检测，3个主要组分的最大吸收值分别在280nm,216nm和190nm^200nm 的末端吸收。用HPLC固定波长检测，3个主要组分均已经初步得到纯化。 关键词:致病杆菌;抗菌物质;分离;作用机理 Abstract Xenorhabdussp.CB43strainisasymbioticalbacteriumislolatedrfomanewinsect pathogenicnematodesSteinernemaceratophorum,whichwasisolatedrfomNortheast ChinabyInstituteofAgriculturalEnvironmentandSustainableDevelopment,CAAS. Physicalandchemicalpropertiesand16srRNAanalysisshowedthatCB43strainwasquite differentrfomotherpublishedspecies,andmaybeanewone.Researchresultsshowedthat themetabolitesofXenorhabdussp.CB43strainexhibitedgoodantifungalactivitytomany pathogenicfungiespeciallytoBotrytiscinerea.Itismeaningfultoisolateandidentifythe antibioticsubstancesrfomXenorhabdussp.CB43strainandstudytheinhibitionandthe mechanismofactionagainstBotrytiscinerea. Thispaperreportedtheinhibitionandthemodeofactiona