野生二粒小麦1y高分子量谷蛋白亚基的分子克隆及其“表达—沉默”机理探讨.pdf

野生二粒小麦lay高分子量谷蛋白亚基的分子 克隆及其“表达一沉默’’机理探讨 研究生：郑雯(作物遗传育种) 指导教师：伍碧华研究员 摘 要 aestivum 野生二粒小麦(Triticum L．，2n 源。已有研究表明，野生二粒小麦具有丰富的HWM．GS变异类型，且存在普通小麦中根 本不表达的1Ay亚基。本研究通过基因克隆与染色体工程相结合的方法，对野生二粒小 麦中的朋y基因进行了分子克隆及其结构研究，以探讨J匆基因的“表达一沉默”机制， 获得主要结果如下： 1．野生二粒小麦高分子量谷蛋白lay亚基的分离与鉴定 材料均为明显表达三条带，另有一条相对其他三条带显得弱的带，怀疑其为表达的lay 亚基。为检测上述疑为lay亚基条带的真实与否，本研究进一步进行了分子克隆。用简 (AY260548)的DNA序列同源性最高。 2．野生二粒小麦高分子量谷蛋白1At亚基的分子序列特征 供试材料D1的lAy基因的核酸序列与乌拉尔图小麦(Z 个氨基酸残基)的结果，对本研究的供试材料D1和D100进行类推，如果忽略其提前 终止密码子，得到假定的氨基酸序列也包括信号肽，N．末端，C．末端和中心重复区。但 的核酸和氨基酸序列长度则与之相同。 3．高分子量谷蛋白亚基lAy基因沉默的分子基础 首次发现在供试材料D1的整个编码区内仅在N一末端出现唯一的提前终止密码子， 而以往报道的提前终止密码子均出现在中心重复区。通过供试材料D100的lay基因序 联体密码AAA突变成终止密码子TAA的现象，这无疑显示出野生二粒小麦lAy基因沉 默机制的特异性。同时，通过对野生二粒小麦与普通小麦杂交后代lAy基因的分子克隆 和序列分析，首次发现染色体工程过程会导致子代中产生新的终止密码子，而且其位置 具有相对稳定性。据此推测，被认为在普通小麦中永不表达的lAy基因很可能是由于一 粒系小麦在进化为异源六倍体普通小麦(AABBDD)的过程中，出现了新的提前终止密 码子所致。 4．小麦高分子量谷蛋白亚基性状遗传的分子证据 且其上下两代的提前终止密码子在数目和位置上均保持完全一致。这无疑为高分子量谷 蛋白亚基是稳定遗传的质量性状提供了分子佐证。 关键词：野生二粒小麦；lAy高分子量谷蛋白基因；分子克隆；染色体工程；基因表达 与沉默 Molecularof GenesAndThe CloningY-·type ，， - Glu．A1 Mechanism-nof‘咀o℃ssionisSilence’’Forsni 乃掣讹跖mdicoccoides Geneticand ZhengWen(Crop Breeding) Dr．WuBi·Hua Directed by Abstract ancestor ofZaestivumL． Triticum thedonor dicoccoides(2n=4x=28，AABB)isspecies