食品中罂粟壳成检测方法研究.pdfVIP

摘 要 在众多的食品安全问题中，滥用非食品加工用添加物的不法行为给食品安全带来严 重隐患。罂粟壳主要含有吗啡、可待因、罂粟碱等生物碱成分。由于罂粟壳对机体的作 用类似吗啡，长期食用所造成的危害与吸食海洛因相似，因此国家将其列入麻醉药品予 以管制，禁止非法供应、运输和使用。一些不法分子为了经济利益将其加入食品中，严 重危害人们的健康。因此，建立一种分析掺入食品中的罂粟壳生物碱的简便、准确、高 灵敏度的检测方法是迫切而有重要实践意义的。 本文建立了高效液相色谱和分子生物学检测两种方法检测掺入食品中的罂粟壳生 物碱。 方法一，高效液相色谱检测法。样品经超声-微波协同萃取后，用有机溶剂纯化， 采用Agilent XDB-C18 （4.6×150 mm ）色谱柱，磷酸缓冲盐- 乙腈为流动相梯度分离，流 速为1 mL/min，紫外检测波长分别为吗啡210 nm ，可待因213 nm ，罂粟碱253 nm ，外标 法定量分析。结果表明，三种生物碱的标准曲线线性相关系数范围均达到0.9999 ；方法 检出限（LOD ）分别为0.5 µg/mL、0.2 µg/mL、0.4 µg/mL ；平均回收率分别为87.87%、 90.80%、89.47%；精密度相对标准偏差(RSD)分别为：1.276%、1.523%、 1.926%；重现性相对标准偏差（RSD ）分别为：1.268%、1.687%、1.738%。 方法二，分子生物学检测法。样品用改良的CTAB法提取DNA ，将PVP-40与V 共用 C 防止氧化。PCR反应体系最终确定为：总反应体系为25 µL 。其中包括1µL （5 U/µL ）Taq E ，2.5 µL 10×PCR buffer （Mg2+ ），3.5 µL dNTPs混合物，正向和反向引物各为1.5 µL， 模版5 µL，ddH O 10 µL 。PCR反应体系扩增条件：94℃预变性5 min，在按94℃30 2 s→60℃30 s→72℃60 s进行35个循环，最后72℃延伸6 min 。PCR反应产物在2% 的琼脂糖 凝胶中进行电泳，凝胶成像系统观察结果。 本试验建立的两种方法均可测定掺入食品中的罂粟壳。方法一具有回收率高、灵敏 度高、精密度高等优点，可适用于食品中罂粟壳生物碱的检测；方法二仅对分子生物学 检测这个方法进行初探，其中还有需要改进的地方，具有广阔的应用前景。 关键词：罂粟壳生物碱；高效液相色谱；超声-微波协同萃取；基因检测；DNA 提取； PCR Study on the Detection Methods about the Opium Poppy Husk Added in Foods Author: Feng Lijuan Major: Agriculture product processing and storage engineering Supervisor: Zhao Wen Abstract Among the many food safety problems, the wrongful act about abusing the non-food processing additives bring to a serious food safety risks. The opium poppy husk contains morphine, codeine, papaverine and other alkaloids. Because of the organism effect to the opium poppy husk like the morphine,