中国野生刺葡萄抗白腐病NBS-LRR类抗病基因 同源序列的分离与鉴定.pdfVIP

中国农业科学 2013,46 4 :780-789 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.04.012 中国野生刺葡萄抗白腐病NBS-LRR 类抗病基因 同源序列的分离与鉴定 1 2 1 1 1 1 3 张 颖 ，李 峰 ，刘崇怀 ，樊秀彩 ，孙海生 ，姜建福 ，张国海 1 2 3 （中国农业科学院郑州果树研究所，郑州 450009 ； 北京市延庆县果品服务中心，北京 102100； 河南科技大学林学院，河南洛阳 471003 ） 摘要： 【目的】通过同源克隆法从刺葡萄 ‘高山2 号’叶片中得到抗白腐病基因的同源片段，为筛选葡萄抗 白腐病基因奠定基础。【方法】根据已知植物抗病基因NBS-LRR 保守区设计简并引物，从高抗葡萄白腐病刺葡萄 ‘高山2 号’的基因组DNA 与cDNA 上得到抗病基因同源片段 RGAs ，并对其表达分析进行检测。【结果】从刺葡 萄 ‘高山2 号’上获得了10 个NBS-LRR 类抗病基因同源片段，10 条葡萄RGAs 间在氨基酸水平上的同源性表现出 丰富的多态性，进一步分析发现，在10 条葡萄RGAs 中，4 个推测所属基因为non-TIR-NBS-LRR 类抗病基因，6 个 所属基因为TIR-NBS-LRR 类抗病基因。定量PCR 分析表明，NB7 基因受到白腐菌的诱导，而且NB7 基因在刺葡萄 叶片中为低丰度表达，NBS6 基因受到白腐菌的诱导后为下调表达。 【结论】在刺葡萄上成功获得了抗病基因同源 序列，通过荧光定量PCR 分析发现，NB7 基因与NBS6 基因都受到白腐菌的诱导表达，为最终克隆得到葡萄抗白腐 病基因奠定基础。 关键词：中国野生葡萄；刺葡萄；白腐病；NBS-LRR；抗病基因同源序列 Isolation and Identification of NBS-LRR Resistance Gene Analogs Sequences from Vitis davidii 1 2 1 1 1 1 3 ZHANG Ying , LI Feng , LIU Chong-huai , FAN Xiu-cai , SUN Hai-sheng , JIANG Jian-fu , ZHANG Guo-hai 1 2 Zhengzhou Fruit Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Zhengzhou 450009 ; Fruit Service Center of Yanqing County, Beijing 102100; 3College of Forestry, He’nan University of Science Technology, Luoyang 471003, He’nan Abstract: 【Objective 】 The purpose of this study was to get white rot disease resistant homologous clips from Vitis davidii ‘Vitis davidii cv. Gaoshan 2’, which will provide an effective means for screening white rot disease resistant gene. 【Method 】 According to the known plant resistance genes NBS-LRR conservative area, degenerate primers were designed and used to clone targeted resistance gene analogs using templates of genomic DNA and cDNA from white rot disease resistant variety of Vitis davidii ‘Vitis davidii cv. Gaoshan 2’. Then the gene expression analysis was performed. 【Result 】 Ten NBS-LRR kinds of resistance gene analogs from Vitis davidii ‘Vitis davidii cv. Gaoshan 2’ were obtained, and their amino acid sequences showed r