家猫卵巢组织的低温冷冻保存研究.pdf

捅 费 本试验通过两步法、经典法、玻璃冷冻法溶液VSl和玻璃冷冻法溶液DAP213四 种处理冷冻保存了50只家猫的卵巢皮质薄片。通过对新鲜和冷冻复苏后的卵巢组织 进行组织学观察、电镜观察，分离冷冻后卵巢组织的卵泡进行体外培养并检测培养液 中雌激素水平，从而检验猫科动物卵巢组织在超低温冷冻后是否保存活性，进而选择 一种较为适合猫科动物卵巢组织保存的冷冻方法。 组织学切片显示，四种冷冻处理以玻璃化冷冻法溶液VSI处理组对卵巢组织、卵 泡正常形态造成的损伤较小。电镜观察可见在冷冻保存后卵母细胞的超微结构如：透 明带、微绒毛、微管和皮质颗粒等受到了不同程度的破坏。 使用酶法结合机械法分离卵泡，平均每只家猫可获得卵泡33．78个。用台盼兰死 活染色计算卵泡存活率，两步法、经典法、玻璃冷冻法溶液VSl和玻璃冷冻法溶液 DAP213四种处理得到的卵泡存活率分别为34．5％，40．0％，53．4％和47．2％。 经过四种处理冷冻保存的卵巢组织，复苏后分离得到的直径为100～2109m的卵 泡333个用于体外培养，四种处理后分离的卵泡均保持了继续生长的能力，其中有一 个卵母细胞经体外培养发育并排出第一极体。经两步法、经典法、玻璃冷冻法溶液 VSl和玻璃冷冻法溶液DAP213冷冻保存后分离得到的卵泡培养4d时卵泡退化率为 86．88％、65．63％、68．45％和56．86％，四种方法间差异不显著；存活卵泡直径与其开 不显著。本试验用酶联法测定卵泡体外培养液中1713．E2水平，所有样本均有阳性反 应，其中测得三个样本中17B-E2含量分别为5．882 pg／50p]、2．951pg／509l和1．299 pg／509l。表明四种方法冷冻后的颗粒细胞均具有活性，保持了分泌雌激素的功能。 通过对冷冻后卵巢组织活性的检验，四种方法冷冻保存后的卵巢组织均具有活 性。其中玻璃冷冻法溶液VSl组冷冻效果较好。 关键词：家猫 卵巢组织超低温冷冻 卵泡直径雌二醇 标注：本研究由成都大熊猫繁育研究基金会赞助 ofdomesticcatovariestissues Cryopreservation Wei Juan(Foundationveterinarynedicine) Directed by： Associate pro．MaHeng—dong Associate pro．HouRong Therearemillionsoffolliclesinthe ofdomesticcat．Buta numberof ovary lane them atresia their leadstoaseriouswasteof preantral undergoduring stage，which genetic and mammalianovariestissueswith breedingresource．Storing cryopreservation can solvethis alsooffersaneffectivemethodtoretrieval technologyeffectivelyproblem．It andutilizesthese and resourcesofsome latentgeneticbreeding endangeredspecies．