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中文摘要 l认11对骨髓瘤细胞生物学特性的影响及其机制研究 中文摘要 多发性骨髓瘤(MuItipIeMyelom，MM)是浆细胞恶性增生性血液肿瘤，发病率较 高，预后较差。其主要特征为：分泌单克隆免疫球蛋白，并伴有免疫球蛋白减少及广 泛溶骨病变和(或)骨质疏松。目前除了造血干细胞移植之外，标准的化疗方案仅能 部分缓解病情，且在治疗过程中易发生耐药和复发，从而导致治疗失败。因此，进一 步阐明疾病发生、发展的分子与细胞机制，对于寻找药物靶标，最终攻克该病具有十 分重要的意义。 肿瘤细胞癌基因的激活或抑癌基因的沉默，是决定肿瘤发生、发展的重要因素。 KAJl，又称CD82，是重要的抑癌基因，广泛分布于正常机体组织中，在前列腺、肺 脏、肝脏、膀胱、骨髓和胎盘中表达丰度较高。作为4次跨膜超家族 些高度保守的具有极性的氨基酸。已有研究表明，KAJl在细胞的聚集、粘附、迁移 和增殖中均有明显的调控作用。本实验室的前期研究表明KAll能够抑制胰腺癌细胞 的增殖、迁移，并有效诱导凋亡。藉此思路，本研究以CD82为靶标，探讨了其对骨 髓瘤细胞生物学性能的影响及其可能机制，希望能够为骨髓瘤的治疗寻找有效的药物 靶标。 为研究KAJl对骨髓瘤细胞生物学特性的影响，我们首先对本实验室构建的重组 OD280珊吸光值，计算病毒的纯度及颗粒滴度。结果显示，重组病毒的纯度为1．37， IU／“，病毒的感染滴度与颗粒滴度的比值约 染滴度分别为l×1011pm／Inl和6．3×10m 为47：l，符合要求。上述结果表明，我们纯化得到了高纯度、高滴度的重组腺病毒 Ad5．KAIl，为进一步功能实验提供了有效的工具。 为探讨骨髓瘤细胞K触1的表达情况，我们采用流式细胞术对骨髓瘤细胞系和原 代多发性骨髓瘤病人CDl38+细胞表面的KAll分子进行了检测。结果显示，在骨髓 得到的两例骨髓瘤病人的CDl38+细胞中，队Il阳性细胞所占的比例分别为17．8％和 16．7％。结果表明，无论在骨髓瘤细胞系还是原代细胞中，KAI的表达均受到明显的 抑制。 为确定KAIl对骨髓瘤细胞感染的最佳感染滴度，我们分别以Ad5．GFP和 中文摘要 KAJl的表达效率能够达到90％左右，而且细胞状态良好。结果提示，后续的功能实 验可以looMOI作为最佳感染强度。 细胞的迁移；也能明显抑制HGF的促细胞迁移作用。(3)K舢l对细胞凋亡的影响： 通过An∞池V、PI双标法检测细胞凋亡，结果显示，与对照相比，K越l能够明显 细胞的增殖和迁移作用，并能促进细胞凋亡。 为进一步探讨KAJl影响骨髓瘤细胞生物学效应的机制，我们对相关信号通路进 行了研究。首先，我们通过流式细胞术及Wre毗mB10t证实础l能够明显上调 促凋亡作用。结果表明，K触1通过CaSp硒e3依赖的途径促进细胞凋亡。另外，通过 Wrestcm 细胞应激性保护信号ERK。为了证实＆Ul与EIⅨ信号相关，我们在实验体系中加 加抑制剂组明显增强，说明KAJl通过EIⅨ信号途径的应激性细胞保护促进细胞凋 对ERK磷酸化的上调作用?WrestemB10t的结果表明HGF可以显著上调骨髓瘤细胞 关。另外我们还初步观察了K越l作用于骨髓瘤细胞后AKT和STAT3通路信号分子 的磷酸化情况，结果发现K舢l能够抑制AKT的磷酸化，但是对S曰盯3的磷酸化水 平没有明显影响。上述结果表明KAJl对骨髓瘤细胞生物学特性的影响是多信号多途 径的调控过程。 综上所述，K舢l能够调节骨髓瘤细胞的生物学特性，包括抑制增殖和迁移，促 进凋亡等。对其机制研究表明，由脚K、JU汀等多条信号途径多种信号分子参与 鼬Ul对骨髓瘤细胞生物学特性的调控。本研究为进一步阐明脚l调控骨髓瘤细胞 的机制提供了实验基础；同时，为研发多发性骨髓瘤的新药靶提供了思路。 关键词：多发性骨髓瘤，K舢l，增殖，迁移，凋亡，信号通路 英文摘要 Theef．fectsandmechanismsofl=．AI1onthe functionsofm aceUs ultiplemyelom Abst