no-1886节糖代谢和脂代谢的作用及机制.pdf

摘 要 研究背景和目的 合成化合物 NO-1886是本人与日本德岛大 缘制药厂合作研究开发的一种抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS) 新药。近几年来，本人首创性地将NO-1886用于糖尿病和糖尿病并 发AS的动物模型的治疗，发现NO-1886有重要的降血糖作用，为 此本人在世界各主要国家申请了新药发明专利。 NO-1886是一种脂蛋白脂酶(lipoproteinlipase,LPL)活化剂。 LPL是体内调节脂蛋白代谢的关键酶之一。体内LPL活性降低会导 致血甘油三AN(triglycerides,TG)升高和高密度脂蛋白胆固醇 (high-densitylipoproteincholesterol,HDL-C)降低。TG升高和HDL-C 降低是冠心病的重要危险因素。己知NO-1886促进LPLmRNA表 达，提高LPL活性，因而降低血TG、升高HDL-C，抑制胆固醇喂 养动物的AS病变。 糖尿病是一种葡萄糖代谢紊乱的疾病，往往伴随有脂质代谢异 常，如高TG血症和HDL-C水平降低。改善糖尿病的脂代谢紊乱， 糖代谢紊乱亦会得到改善。胰岛素抵抗是2型糖尿病发病的机制之 一。肥胖时，脂肪组织可以产生更多引起胰岛素抵抗的介质，如肿 瘤坏死因子(tumornecrosisfactor-a,TNFa)、自由脂肪酸(freefatty acids,FFA)等。FFA蓄积于非脂肪组织，导致肝脏脂肪样变性，引 起肌肉和肝脏中葡萄糖代谢和胰岛素敏感性的降低，使胰岛p一细胞 功能和结构受损。过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated PPARs)控制多种细胞和代谢过程 与糖尿病、肥胖症、动脉粥样硬化紧密相关。胰岛素的主要生理功 能是在其靶组织中刺激葡萄糖的转运，这有赖于葡萄糖转运蛋白4 (glucosetransporter4,GLUT4)由细胞内的储存部位转移到细胞膜 表面。除胰岛素外，还有多种具有类似胰岛素作用的物质可诱导 GLUT4转位。 本博士论文研究NO-1886对高脂/高蔗糖饲料诱发的实验动物 糖尿病糖脂代谢和AS病变的作用，探索作用的机制。试图回答的 问题有:NO-1886能否降低血浆TNFa,FFA水平，减轻FFA对糖 脂代谢和胰岛p一细胞的损害，是否调节肝脏、肌肉、脂肪组织PPARs 和TNF-(x基因的表达，能否通过影响胰岛素的细胞内信号传导途径， 如影响受胰岛素调节的GLUT4，从而增强葡萄糖的代谢，起降血糖 的作用? 方法 1)动物及喂养:将新西兰兔、贵州小香猪分别随机分为 对照组、高脂高糖喂养组、高脂高糖喂养+NO-1886治疗组;分别 用正常饲料、高脂高糖饲料、高脂高糖饲料补充1.0%NO-1886喂 养6-8个月。2)血糖、血脂代谢研究等:每个月末取动物空腹血， 测定血糖、胰岛素、血浆总胆固醇、HDL-C,TG.TNFa,FFA水 平。每三个月作一次口服葡萄糖耐量试验。3)苏丹IV染色法计算 主动脉AS病变面积4)用扫描电镜观测脂肪细胞大小5)肝脏HE和 肝糖原染色以及油红O染色观察肝脂肪样变 6)胰腺HE染色、 胰岛素免疫组化染色、透射电镜观察超微结构。7)NO-1886对 PPARs,LPL,TNFa表达的影响:提取小型猪肝脏、脂肪和肌肉组 织RNA，用RTPCR检测PPAR(x,PPARy,LPL及TNFa的表达水 平。8)NO-1886对CHO细胞GLUT4易位的影响:转染CHO细胞 使其永久性地表达被标记的GLUT4c-myc基因。CHO-GLUT4myc 细胞置入370C温育，然后置入胰岛素和NO-1886中分别温育，用 荧光素标记后在荧光显微镜下观察GLUT4的转位。 结果 NO-1886显著地降低糖尿病实验动物血浆葡萄糖和TG, 升高HDL-C;而且，对AS病变具有抑制作用。高脂高蔗糖喂养使 小香猪脂肪细胞肥大，血浆TNFa和FFA水平均增高，发生明显肝 脂肪样变性，引起胰岛素抵抗。在高脂高蔗糖饲料中添加了 1% NO-1886后，小香猪脂肪细胞增大被抑制，血浆TNF-a,FFA浓度 均显著降低，血浆葡萄糖清除率以及胰岛素分泌急性相都有了明显 改善，肝脂肪样变性明显减轻，胰岛p细胞的结构和功能受到保护。 NO-1886也能促进小香猪脂肪组织LPL的表达，抑制TNFa基因表 达，高调PPARy。用NO-1886处理CHO细胞可以促进GLUT4从 细胞内转位