notch信号路中的notch2、hey2基因在单纯房间隔缺损、室间隔缺损中的突变研究.pdf

Notch 信号通路中相关基因 Notch2 、Hey2 在单纯房间隔缺损、室间隔缺损中的突变研究 中文摘要 Notch 信号通路中相关基因Notch2 、Hey2 在单纯房间隔 缺损、室间隔缺损中的突变研究 中文摘要 目的：本研究通过筛查 Notch 信号通路中 Notch2 、Hey2 在先天性房间隔缺损 （Atrial septal defect ，ASD ）及室间隔缺损（Ventricular septal defect ，VSD ）突变和 单核氨酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNP），探讨基因Notch2 、Hey2 与先天性心脏病发病（Congential Heart Disease，CHD ）发病机制的相关性，为Notch 信号通路在先天性心脏病发生学提供理论依据支持。 方法：选择先天性房间隔缺损、室间隔缺损患者各50例和健康儿童100例，应用 聚合酶链反应(Polymerase chain reaction，PCR)方法扩增Notch2基因的第7、8、32、33、 34外显子和Hey2基因的所有5个外显子的序列，PCR产物纯化后经DNA测序仪直接 测序，然后与NCBI数据库中Notch2 、Hey2基因的序列进行比对，并与健康对照组比 较，观察Notch2 、Hey2基因突变情况；利用生物信息学方法预测Notch2 、Hey2基因 点突变对其蛋白结构和功能影响。 结果：1.我们在 Notch2基因的第7号、8号、33号外显子没有找到任何突变位点； 在32号外显子发现4个新的杂合性突变位点：2个错义突变 c.C5903T （p.Ala1968Val ）、 c.A5972T （p.His1976Leu ）分别在1例 ASD 和1例 VSD 患者上发现，2个同义突变 c.C5842T （p.Leu1948Leu ）、c.C5925T （p.Asp1975Asp ）分别在2例 ASD 和1例 ASD 患者上发 现；在34号外显子中发现10例杂合性突变位点，4个错义突变：c.C6178T、c.A6343G、 c.A7375G、c.C6313T，其中，c.C6178T 和 c.A6343G 分别在3例 ASD 和1例 VSD 患者 上发现，c.A7375G、c.C6313T 则在健康儿童对照组中发现；6个同义突变：c.C6561T、 c.A6435G、c.C6184T、c.C6159T、c.C6421T、c.T7341A，其中 c.C6561T 在2例 ASD 中发现，c.A6435G 和 c.C6184T 各在1例 VSD 中发现，c.C6159T 在1例健康对照组中 发现，c.C6421T 分布在6例 ASD 、4例 VSD 和7例健康对照组中，c.T7341A 分布在4 例 ASD 、3例 VSD 和7例健康对照组中。cDNA6421和 cDNA7341 的等位基因频率和 基因型频率在实验组和对照组间分布的差异无统计学意义(P 均0.05) 。 I 中文摘要 Notch 信号通路中相关基因 Notch2 、Hey2 在单纯房间隔缺损、室间隔缺损中的突变研究 2.采用了 SIFT 和 PolyPhen 两种生物信息学方法对 Notch2 基因的 c.C5903T （p.Ala1968Val ）、c.A5972T （p.His1976Leu ）、c.C6178T （p.Arg2060Cys ）、c.A6343G （p.Ser2115Gly ）4个突变位点分析结果提示，c.C5903T 与 c.C6178T 突变位点有可能 影响蛋白功能，而 c.A5972T 与 c.A6343G 对蛋白质功能的影响是良性的。 3.HEY2基因的所有外显子没有发现伴氨基酸改变的错义突变，仅找到了一个已 报道的同义突变位点（rs=112235907 ），该位点的等位基因频率和基因型频率在实验 组和对照组间分布的差异无统计学意义（P0.05 ）。 结论：1.Notch2 基因可能是 ASD 患者相关的致病基因； 2.Hey2基因可能不是ASD 、VSD患者相关致病基因。 关键词：先天性心脏病；房