nrf2在液压击脑损伤抗神经细胞凋亡中的作用.pdf

目 录 中文摘要………………………………………………1 英文摘要……………………………………………4 研究论文Nrf2在液压冲击脑损伤抗神经细胞凋亡中的作用 前言…………………．……………………．．8丑lJ吾…………………．……………………．．苍 材料与方法……．．…．．………………．………．8 9 结果…………………………………………．1 附图…………………………………………．2l 8 附表…………………………………………2 讨论……………………………………………．．31 结论……………………………………………．．33 参考文献…………………………………………．34 综述继发性颅脑损伤发病机制的研究进展…．………………．37 致谢…………………………………………………52 个人简历……………………………………………．．53 中文摘要 Nrf2在液压冲击脑损伤抗神经细胞凋亡中的作用 摘 要 目的：观察Nrf2基因敲除小鼠液压冲击脑损伤后水肿脑组织中凋亡蛋 2表达变化和神经细胞凋亡改变，探讨Nrf2在液 l刍Casepase．3、Casepase．1 压冲击脑损伤中所发挥的抗神经细胞凋亡作用。 方法：用雄性Nrf2基因正常和基因敲除小鼠制作液压冲击脑损伤模 组，n_8)。其中，对照组仅头颅开窗不进行液压冲击损伤；损伤组头颅 开窗并常规制作液压冲击脑损伤模型。 各实验组小鼠于24h后采用神经功能缺损评分(NSS)方法进行评分， 然后过度麻醉，断头，留取组织标本。迅速从损伤区前缘取重约50mg水 肿脑组织，采用干湿重法测量脑组织含水量；经损伤区切成约4mm薄层 冠状脑组织，用多聚甲醛固定，采用HE染色观察组织形态学变化；免疫 2的表达；原位末端荧光标记 组织化学染色方法检测Caspase．3、Caspase．1 (n肥L)法检测神经细胞的凋亡情况；取损伤区域后缘脑组织采用免 疫蛋白印迹法(Western 结果： 1神经功能缺损评分 脑损伤后，小鼠出现了神经功能缺损症状。与对照组(NC)比较， (5．88+1．36)比较无统计学意义(．胗O．05)。 2组织学观察 Nrf2愧组和Nrf2-／-NC组肉眼观察：脑组织软脑膜完整表面光滑， 脑沟及脑回清晰可见，脑表面及颅底无挫伤、出血、充血等表现。镜下观 察：脑组织细胞结构完整，排列有序，核膜完整，核仁蓝色淡染。 中文摘要 脑沟回存在积血，切面观察可见皮层下有散在点状出血，严重者可见脑室 内出血。镜下观察：挫伤灶周围细胞出现水肿且水肿程度明显，胞浆淡染， 部分出现空泡样变性伴胶质细胞增生。 3脑组织含水量测定 采用Elliot公式对小鼠脑组织含水量进行测定。与对照组相比，损伤 各组小鼠脑组织含水量明显增高；Nrf2+／+NC组(78．37+0．18)与Nrf2-／-NC Nr也4TBI组(82．89+0．20)之间有明显差别(氏O．05)。 4免疫组化技术检测Caspase．3和Caspase．12表达 5TUNEL法检测神经细胞凋亡 (PO．05)。 6Westem 2蛋白表达情况 Blot测定Caspase．3和Caspase．1 2 中文摘要 (氏O．05)。 结论： Caspase．3和Caspase一12上调表达，诱导神经细胞凋亡。 作用。 关键词：Nrf2；基因敲除；液压冲击脑损伤；神经功