erkp-er在乳腺增生和癌组织中的表达.pdfVIP

中文摘要 ， (乳腺癌是影响女性健康最常见的恶性肿瘤之一，占女性癌症 死亡率的首位。现已普遍认为其发生与乳腺导管上皮非典型增生 protein kinase，MAPK)级联途径异常与肿瘤发生发展关系受到了 生物工作者的广泛重视。MAPK级联途径，具有信号汇总功能，在 信号转导过程中起着重要作用。 细胞外信号调节激酶(Extracellular kinase， signal—regulated ERK)，是最早发现的MAPK亚类，是一种保守的丝氨酸／苏氨酸 蛋白激酶，广泛表达于多种人类细胞。多种生长因子、激素、神经 递质与相应受体结合后，均能通过细胞内信号分子的逐级传递作 用，使其磷酸化激活，从而参与细胞生长、发育、分裂及细胞间功能 同步等生理过程，并在细胞恶性转化的病理过程中起作用。 的活性形式，可转入细胞核，通过磷酸化活化转录因子而调控特定 基因的表达。许多细胞培养模型研究表明：ERK(MAPK途径的活 活是肿瘤形成所必需的。但是直到1997年Sivaraman等才发现 ERK／MAPK促进了人类肿瘤恶性表型的转化，其后在其它上皮来 源的肿瘤组织中有关ERK／MAPK的研究报道亦有逐渐增多的趋 蛰●q 本实验我们检测ERK：／p—ERK在乳腺增生和癌组织中的表 达情况，旨在探讨ERK／MAPK在乳腺导管上皮细胞癌变过程中的 作用。这里我们应用了特异识别P—ERK的磷酸化抗体检测有活 性的ERK／MAPK的表达，并观察其在乳腺各种病变组织中的定 位。目前，有关其在人类肿瘤组织中的研究报道甚少，而且在乳腺 癌方面尚未见研究报道。 ／ 材料与方法 f ＼标本：乳腺组织蜡块67例取自中国医科大学附属第一lf缶床医 院、附属第二临床医院病理科。均为女性，年龄2l一73岁。依据 中华病理学杂志编辑委员会所推荐的乳腺增生症及乳腺癌组织学 分类标准进行。 方法：免疫组织化学s—P法。抗原修复：复合酶(ED0022，武 汉博士德生物工程有限公司)37℃孵育25分钟；兔抗人ERK：多 克隆抗体(SC一154，北京中山生物技术有限公司)以1：100稀释度 山生物技术有限公司)以1：200稀释度37％孵育1．5小时；DAB 显色(DAB-0030，福州迈新生物技术开发公司)。用吸管吸去血 清，其余各步之间用PBS(pH=7．4)冲洗三次，每次5分钟。PBS 代替一抗作阴性对照。余均按标准操作步骤进行。 结果判断：ERK2蛋白阳性表达于细胞浆，按着色强度分级： 无着色为(一)，浅黄色为(+)，棕黄色为(++)；p—ERK蛋白阳 性表达见于细胞核和／或细胞浆，按阳性细胞百分数分级：无着色 为(一)，阳性细胞数10％为(+)，阳性细胞数≥10％ 为(++)。 for Windows 统计学分析：采用SPSS 10．0统计分析软件，应用 X2检验方法进行统计分析。 实验结果 1．ERK2蛋白在乳腺各组病变中的表达： 所有病例中ERK蛋白表达见于乳腺导管上皮细胞。在导管 单纯性增生组织中ERK：蛋白呈弱表达(62．5％，5／8)或阴性表 达；35例导管非典型增生组织中26例ERK2蛋白表达阳性，百分 率为74．3％。随着非典型增生程度增加，ERK：蛋白阳性率逐渐 ·2· 增强，在导管轻度、中度、重度非典型增生组中ERK：分别为 70．o％、75．0％、76．9％。24例乳腺癌组织中22例呈阳性表达， 百分率为91．6％。导管内癌组和浸润性导管癌组阳性率分别为 90．9％和92．3％。经统计学分析，乳腺癌组与乳腺单纯性增生组 有显著差异(P0．05)。 2．P—ERK蛋白在乳腺各组病变中的表达： 所有病例中P—ERK蛋白表达见于导管上皮细胞，以核表达 为主；少数病例可见明显的浆表达，伴或不伴核表达。在乳腺导管 单纯性增生组中未见P—ERK蛋白表达。35例乳腺导管非典型 增生组织中9例P—ERK蛋白表达阳性，百分率为25．7％。在导 管轻度、中度、重度非典型增生组中