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关于乙肝血清学检验中问题的分析 　　摘要：本文重点分析了乙型肝炎病毒的血清学检测是临床实验室的常规项目，人体感染乙肝病毒后，其血清中的抗体变化都会形成一种规律。有几种现象是较常见的，也有几种现象是不常见的，其原因是多种因素造成的。探讨其根本原因是由病毒变异或人体免疫状态改变所引起的。抗乙肝药物以及疫苗的应用也可使乙肝病毒的突变率明显增加。由于基因变异造成其合成的蛋白质构象发生改变，使临床血清学指标发生改变。而人体免疫状态的改变也可使人体在感染乙肝病毒时发生无免疫应答或免疫应答低下，使临床无法检测出某种抗原或抗体，从而使血清学指标发生改变。 　　关键词：乙肝血清学 不常见 ；ELISA 乙肝病毒亚型 　　一、引言 　　乙型肝炎病毒的血清学检测是临床实验室的常规项目，即我们俗称的“三对”。人体感染乙肝病毒后，其血清中抗原、抗体的变化都会形成一种规律，其中有几种现象是我们经常遇到的，如“大三阳”“小三阳等。而有几种不常见的现象是我们难以用乙肝病毒感染后的血清学指标规律的改变来解释的。这几种不常见现象的出现是多种因素造成的，除试剂、操作方法及其他干扰因素外，其根本原因是病毒变异或人体免疫状态改变所引起的。近几年来，抗乙肝药物以及疫苗的应用使乙肝病毒的突变率明显增加。由于基因变异造成其合成的蛋白质构像发生改变，使临床血清学指标发生改变。而人体免疫状态的改变也可使人体在感染乙肝病毒时发生无免疫应答或应答低下的现象，使临床无法检测出某种抗原或抗体，从而使血清学指标发生改变。本文统计了1500份同种试剂检测的乙肝病毒血清学指标，包括乙肝表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体以及核心抗体IgM，其中有15份为不常见现象，占1.5%。 　　二、资料与方法 　　（一）、血清样本 　　选择2012年1月至2013年1月于我院检验科检测乙肝两对半试验的血清样本1500例，其中，男性836例，女性664例；年龄在10-70岁之间，平均年龄（34.22±10.26）岁。经统计，患者的年龄、性别对乙肝血清学检测的常见或者不常见现象无统计学意义，基线资料一致。 　　（二）、检测试剂 　　ELISA试剂盒由上海丽臣生物科技有限公司和上海恒远生物科技有限公司生产，选择两种公司同一批号的ELISA试剂盒，以避免试剂造成的偏差。 　　（三）、相关仪器 　　ELX800酶标仪（BIO-TEK INSTRUMENTS.INC.），LXJ-ⅡB离心机（上海安亭科学仪器厂制造）。 　　（四）、方法 　　1.收集上清液 　　空腹取上述来我院检验科检测乙肝两对半患者的静脉血3-5ml于采血管中，将采好血的采血管置于离心机中，以3000转的转速离心10min。接着轻轻取出已离心好的采血管，防止过大的动作造成振荡而使上清液浑浊而废用，去盖，用1000ul的移液器吸取上清到1.5mlEP管中，在EP管上做好相应标记，如患者姓名及日期等，放于-80℃冰箱，保存待用。 　　2.ELISA检测 　　将收集好的上清液置于同一个实验室的相同条件下，每一个相同的样本分别使用上海丽臣生物科技有限公司生产的ELISA试剂盒（下称L组）和上海恒远生物科技有限公司生产的ELISA试剂盒（下称H组），严格按照各试剂公司的说明书进行操作，并在酶标仪上读取相关数据，保存以便分析。 　　（五）、统计学分析 　　对所有研究数据均采用SPSS18.0软件进行处理。计量资料的描述以（±S）表示，计数资料用x2检验，配对t检验，当P≤0.05认为两者差异有统计学意义；P0.05认为两者差异无统计学意义。 　　三、结果 　　我们统计的不常见的现象主要有以下三种： 　　（一）、表面抗原和表面抗体同时阳性 　　表面抗原是乙肝病毒感染的特异性指标。表面抗体一般与表面抗原消失数月后开始在血液中出现，是表面抗原刺激机体产生的特异性保护抗体，是乙型肝炎感染终止及有免疫力的标志。一般情况下，血清中表面抗原和表面抗体不能同时存在，但随着大量乙肝治疗药物的临床应用以及乙肝疫苗的推广使用，此种现象的患者有所增加，其原因如下：（1）前后不同亚型的乙肝病毒感染；（2）乙肝病毒携带者接种疫苗后产生表面抗体，由于s基因的变异，其编码的抗原性改变，原型抗体不能将其抗原消除。有研究者统计，随访某地区儿童由于接种疫苗后发生的s基因变异，5年上升13.5%，10年上升22.0%。由此可见，接种疫苗是导致s基因变异的根本原因。另外，表面抗原能与表面抗体构成免疫复合物，所以，少数慢性乙肝患者可出现表面抗原和表面抗体同时阳性。 　　（二）、表面抗原单独阳性 　　此种现象主要见于：（1）急性乙肝病毒感染的最早期，一般随之出现表面抗原和表面抗体IgM，若以后仍为持续性单一的表面抗原阳性，需用表面抗原确认试验以避免假