中国汉族人群d6s309、d2s44基因座多态性及其法医学应用研究.pdf

中 文 摘 要 中国汉族人群D16S309,D2S44基因座多态性及其法 医学应用 摘 要 目的:在人类华因组DNA中，存在着许多由7-70bp大 小相同或相似的核二什酸基本单位串联重复排列的DNA序列， 称为可变数 目串联重复序列 (Variablenumberoftandem repeat,VNTRs)。这些重复序列遵循孟德尔遗传方式呈共显 性遗传，构成完整的遗传标记。其中，某些VNTR基因座不 仅存在重复单位拷贝数目的不同，还存在重复单位内部结构 (i1变异，称为小卫星变异重复1j列(minisatellitevariantrepeat, MVR)aD16S309.D2S44基因座即属此类。常染色体小卫 星基因座D16S309(MS205)定位于 16号染色体短臂的亚 端粒区，表现出高度的多态性，在欧洲人群中杂合度为 99.7%。与其他高度可变的基因座不同，小卫星D16S309长 度相对较短，月前发现的该华因座所有的等位基因均小于 5kb口其核心序列为45-54bp,重复次数8--87次。鉴于这- 特性，我们可以通过MVR-PCR技术检测其全部等位基因结 构。该旅因座种系突变率相对较低，为0.4%.D2S44地因座 位一1-2号染色体近肴丝粒处(2821.3-q22)，核心序列为31bp. 用RFLP的方法对该华因座进行人群分析发现:该摧因座的 DNA片段经Hinfl酶切后所得片段人小狱现 一个双峰的分布 趋势，以高加索人群最为明显J‘纯，卜，出现频率址高的DNA 片段是2.8kb和 4.1kb。进 步旬I-究表明，引起 D2S44琴因 座酶切片段双峰分布的原 卜}斤小是限制性酶切华Iti座的多 中文 摘 要 态性，而是由于D2S44基因座内部的等位基因存在差异。为 了探讨D16S309基因座和D2S44基因座在中国汉族人群中 分布的多态性，为DNA指纹数据库的构建及法医学应用提 供基础资料，本文采用MVR-PCR技术和聚丙烯酸胺凝胶电 泳及银染法对 116名无关个体进行快速检验，其中，D2S44 样本数为116,D16S309为 106(来自116名无关个体)，并 对 10个家系样品的两个基因座分别进行了研究。 方法:无关个体及家系样本的基因组DNA的提取分别 采用酚/氯仿法和Chelex法。扩增D16S309基因座时，每个 标本设置两个反应管 (A管和T管)，分别加入低浓度的两 种特异性引物205-TAG-A,205-TAG-T和高浓度的205B和 TAG.26个循环后，可得到 自205B序列起至a一型或 t一型重 复单位的多个长度不等的片段。取上述PCR产物8ul与5ul 含甲酞胺的载样缓冲液混合后在聚丙烯酞胺凝胶中电泳，恒 定电流功率35mA,50V/cm，电泳3小时。经硝酸银染色， 可从A,T两行的电泳谱带中读出a一型和t一型重复单位的顺 序和数目。扩增D2S44基因座时，每个标本设置三个反应管 (I管，II管和m管)，分别加入低浓度的三种特异性引物#1, #2或#3和高浓度的3’侧翼引物和TAG。其余方法与D16S309 基因座相同。 结果:D16S309基因座多态性:对中国汉族人群106名 无关个体D16S309基因座的快速MVR-PCR图谱分析，每一 个体平均得到 23个数字编码，未发现任何两个无关个体所 有编码相同，且第一个重复单位显示清晰。各种编码出现的 频率不同，编码3出现的频率最高为56.7%，编码1与2出 现的频率较为接近，分别为7.95%,11.76%。编码4,5,6 中文 摘 要 出现的频率分别为9.4%.11.16%.3.01%。三种重复单位出 现的概率分别为:a型:41%,t型:45.7%,0型:13.29%a 在 106名无关个体中，两个无关个体拥有相同的编码概率为 0.3637,所有个体23个编码均相同的概率为7.88X10-，杂 合度为0.9844，多态信息含量为0.9840，具有很高的个体识 别率。 D2S44基因座的遗传多态性:对中国汉族人群 116名无 关个体D2S44基因座的快速MVR-PCR图谱分析，每一个体 平均得到 11个数字编码。