内毒素致肾髓质皮细胞损伤与水通道蛋白2表达的关系.pdf

·中文论著摘要· 内毒素致肾髓质上皮细胞损伤与水通道蛋白2表达的 关系 目 的 肠屏障损伤导致内毒素入血是梗阻性黄疸时肾功能损害的重要的病理生理机 制之一。既往本课题组通过研究大鼠梗阻性黄疸动物实验时发现，梗阻性黄疸时， 肾集合管上皮细胞中AQP2的表达显著降低。本实验拟在细胞水平上明确内毒素 对大鼠。肾髓质上皮细胞的影响，以及水通道蛋白2表达的变化。 方法 培养并传代大鼠肾髓质上皮细胞系mlMCD．3，选取处于指数生长期的细胞制 作细胞爬片，免疫组化DAB染色法检测水通道蛋白2在大鼠肾髓质上皮细胞 计算细胞抑制率。选取作用明显的终浓度为10Hg／L的内毒素作用于mlMCD一3后 分别在4h，12h，24h，48h用流式细胞仪检测凋亡。用同一浓度的内毒素培养 并做光密度分析。所有计数资料均用均数±标准差形式表示，运用统计软件 SPSSl3．0进行单因素的方差分析，P0．05为差异有统计学意义。 馇 甲 耋日 禾 见，细胞胞浆中大量棕红色颗粒，呈片或呈堆积状排列，证明mlMCD．3表达AQP2， 并且在基础状态下的AQP2主要定位于细胞浆中。同时行阴性对照的细胞做免疫 组化时，没有添加特异性结合的一抗，用DAB染色后胞浆中无棕红色颗粒生成， 整个胞浆为苏木素淡染的蓝色，排除了AQP2表达的假阳性的存在。 LPS抑制肾髓质上皮细胞mlMCD．3增殖。不同浓度分别做单因素方差分析， 于5,g／L时，LPS的浓度变化对细胞增殖的抑制作用差别不大，增大浓度梯度时， LPS对细胞的抑制作用明显增强，具有浓度依赖性。浓度为0．1“g／L的LPS在对 细胞作用的早期，对细胞不仅没有抑制，反而有增殖的作用。当作用时间增加到 72小时时，相邻浓度组间的比较不具有统计学差异，各组间细胞的抑制率无差别。 不同时间组分别行单因素方差比较，具有统计学差异(尸nD髟。但0．1pg／L组12小 时和24小时， 胞的抑制率随时间变化不大。浓度大于等于5,g／L时，任意两两组间对比均具有 统计学差异。LPS对mIMCD．3的抑制作用具有时间依赖性。 作用于肾髓质上皮细胞mlMCD．30h，4h，24h和48h后，经流式细胞仪检测，结 果表明，LPS对mlMCD．3的抑制作用主要表现为细胞凋亡，随作用时间的延长， 细胞凋亡增加(PO．01)，同时作用时间和凋亡率具有直线相关性(月=O．9920)。 对肾髓质上皮细胞mlMCD．3行组化染色可以看出，AQP2的表达主要位于细 胞质，表现为棕黄粗大的颗粒成片或成堆排列。LPS作用于mlMCD．3后，AQP 的表达下调，细胞中棕黄色颗粒变稀疏，且颜色变浅。浓度为10I_tg／L的LPS作用 细胞0小时，4小时和24小时的平均光密度分析，总体比较具有统计学差异 pDD，，。但组间作用时间4小时和0小时比较，不具有统计学差异(P=0．897)， 24小时组和4小时组比较，24组和0小时组比较，明显具有统计学差异(PD．D∥。 证明在短时间内，时间小于4小时，LPS对AQP2表达的变化没有影响，但随LPS 作用时间的延长，AQP2的表达下降。 宝日结论◆匕 制mlMCD一3增殖，具有时间依赖性和剂量依赖性。LPS对细胞增殖的抑制作用主 要表现为诱导细胞凋亡。随作用时间延长，细胞凋亡率增加，两者具有直线相关。 2 LPS介导的肾髓质上皮细胞凋亡通路中，AQP2起重要作用。 关键词 流式细胞法； 大鼠瞥髓葳上皮细胞；浅毒素；水通道蛋密2；CCK．8； 3 ·英文论著摘要· The betweenLPS--induced relationship