y-27632大鼠肝星状细胞肌球蛋白磷酸酶抑制作用的实验研究.pdf

中文摘要 Y027632对大鼠肝星状细胞肌球蛋白磷酸酶 抑制作用的实验研究 摘 要 肝纤维化(hepaticfibrosis)是多种致病因素引起慢性肝 病，进一步发展为肝硬化的～个共同病理途径。细胞外间质 (extracellularmatrix，ECM)的过度合成与异常沉积是其主要 stellate 病理改变。肝星状细胞(hepaticcell，HSC)在肝纤维 化的形成过程中发挥关键作用，它在正常情况下主要储存维 生素A，合成少量胶原，而活化的HSC则转化为肌成纤维 细胞，其自身增殖和胶原合成增加。在HSC中各种信号转 导通路共同参与肝纤维化的形成，因此寻找新的信号转导通 路对肝纤维化的形成机制进行系统研究，有助于对其发病机 制更全面更深刻的理解。 小鸟苷酸三磷酸酶(RhoGTPase)又称小G蛋白，是Ras 超家族成员之一。它通过激活其下游靶分子一Rho相关卷曲 associatedcoilelcoil 螺旋形成蛋白激酶(Rho formingprotein kinase。ROCK)，调节细胞的多种行为和功能，包括收缩、 迁移、增殖及肿瘤细胞的转化和浸润等。Rho／ROCK信号转 导通路的关键信号分子包括：Rho 蛋白磷酸酶(myosin acid，LPA)活化后，将活 信号如溶血磷脂酸(1ysophosphatidic 化信号传递给ROCK，ROCK接受Rho传递的活化信号， 再依次将其底物MP结合亚单位第697位苏氨酸磷酸化而使 之失活，失活的MP不能将肌球蛋白脱磷酸化，从而使胞浆 中文摘要 内肌球蛋白轻链(myosinlightchain，MLC)磷酸化水平升高， 导致肌动．肌球蛋白交联增加，从而促进肌动蛋白微丝骨架 的聚合，引起细胞的多种生物学行为。 MP是一种肌球蛋白限制的特异的去磷酸化Thr-18、 Ser．19的磷酸酶。由催化亚单位、调节亚单位(myosinbinding subunit subunit，MBS或myosinphosphatasetarget l，MYPT1) 和肌动蛋白结合亚单位组成。其调节亚单位接受Rho／ROCK 的活化信号发生磷酸化，使MP失活。ROCK磷酸化MBS 的位点可能有Thr695、Thrs50和Se?54。 细胞迁移是机体正常生长发育以及组织损伤、炎症反应 必不可缺的生理过程。在肝组织修复及肝纤维化形成过程 中，损伤局部大量HSC聚集可能与HSC定向迁移有关。有 I 研究表明，小分子G蛋白Rho家族及其效应分子ROCK 以多种方式参与细胞迁移的调节。L队可以提高肝癌细胞 的迁移和侵袭能力，而阻断Rho／ROCK通路可以抑制肝癌 细胞的迁移和运动，说明肝癌细胞的侵袭被Rho途径推动。 异性抑制剂，能够抑制RoCK介导的多种生物效应，它的 合成极大地促进了Rho／ROCK通路的研究。 迄今，Rho／ROCK信号通路在多种器官组织慢性炎性纤 维化中的作用受到了日益广泛的关注，但在肝纤维化发生中 的作用研究较少。而MP是该信号通路活化的一个标志性指 标。为此，我们应用体外细胞培养技术，探讨Rho／ROCK 水平的抑制作用，从而为肝纤维化的发病机制和有效治疗提 供理论依据。 中文摘要 对LPA刺激的大鼠HSC中MP磷酸化水平的抑制作用，以 及该信号通路对HSC增殖、迁移的影响。 方法：应用含2％胎牛血清、100ILl·mL1青霉素、100 mol·L．1 mmol·L．1谷氨酰胺及1 HEPES的 ∥g·mL1链