载5-fu聚乳纳米微粒对人tenon囊成纤维细胞抑制作用的实验研究.pdfVIP

载5-FU聚乳酸纳米微粒对人Tenon囊成纤维细胞抑制作用的实验研究 制作用的实验研究 专 业： 眼科学 学位申请人： 宋 欣 导 师： 蓝育青副教授 摘 要 青光眼已成为世界范围内占第二位的不可逆性致盲眼病。迄今为止，滤过手 术仍是青光眼治疗的重要手段之一，其手术是通过被切除的小梁组织形成一滤过 通道，使房水外流而达到降低眼压，保存残存视功能的目的。随着现代眼科显微 手术的发展，抗青光眼滤过手术的成功率已大大提高，但在一般情况下手术的失 败率仍有10％～30％，在难治性青光眼更高达49％～89％。而手术失败最直接的 原因就是伤口愈合过程中滤过道的纤维瘢痕化，这是一个受多方面因素影响，涉 及成纤维细胞增殖、移行和胶原合成的复杂的病理生理过程，也是目前青光眼临 床和研究所面临的难题之一。业已证实抗代谢药物5．氟尿嘧啶 由于5-FU在体内的半衰期短，需术后反复多次结膜下注射，存在眼组织机械性 损伤的危险，同时由于其作用于组织和细胞的非选择性，影响了其在临床上的广 泛使用。如何提高该药物对手术滤过区成纤维细胞的特异性抑制作用，维持有效 浓度，减少毒副作用，是提高青光眼手术成功率的关键。纳米技术在医学的应用 和发展，为上述问题的解决提供了契机。根据纳米载药控释系统具有缓释性、靶 向性，可延长药物作用时间，降低药物的不良反应等特点，本研究通过观察载 5-FU聚乳酸纳米微粒(5-fluorouracil-loadeclpolylactic PI．A．NPs)对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞和Ⅲ型前胶原蛋白的作用效果， 为进一步偶联特异抗体制备载5-FU免疫纳米控释系统奠定基础，力图寻找一种 载5-FU聚乳酸纳米微粒对人Tenon囊成纤维细胞抑制作用的实验研究 新型安全有效的防治青光眼手术区滤过泡纤维瘢痕化的新途径，最大限度地提高 青光眼手术成功率。 研究方法：l、体外人眼Tenon囊成纤维细胞的培养及鉴定。2、MTT比色法 微粒(PLA 影响，评价聚乳酸的生物相容性。3、MTT比色法检测不同剂量 内共7个时间点对成纤维细胞生长的抑制作用，计算并比较2种药物在7个时间 表达情况。 研究结果： l、人眼Tenon囊成纤维细胞的培养和鉴定 1．1组织块培养法和混合消化酶培养法均成功培养出人眼Tenon囊成纤维细胞， 细胞成典型的长梭形。 1．2 Vimentin染色免疫化学鉴定均可见阳性物质分布于胞浆中，形态学和细胞 免疫化学鉴定证明所培养的细胞是人眼Tenon囊成纤维细胞。 胞的增殖影响 意义(Po．05)，倒置光学显微镜观察细胞形态没有变化。 影响 值比较差异有统计学意义(Po．05)，两者均对成纤维细胞有抑制作用，具有时 的5-FU．PLA-NPs Ⅱ 载5-FU聚乳酸纳米微粒对人Tenetn囊成纤维细胞抑制作用的实验研究 制作用强于5．FU原药组，其OD值差异有统计学意义(P(0．05)。 的表达 (p(o．05)· 药均对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞具有抑制作用，并使Ⅲ型前胶原蛋白 mRNA的表达水平降低；该抑制作用具有时间和剂量依赖性，随着作用时间的 具有一定的缓释功能，本实验为其进一步偶联特异性抗体制备靶向载药纳米微 粒，行体内动物实验，为最终提高青光眼手术成功率奠定基础。 关键词：纳米微粒，5．氟尿嘧啶，聚乳酸，成纤维细胞，Ⅲ型前胶原蛋白 Ⅲ 载5-FU聚乳酸纳米微粒对人Tenon囊成纤维细胞抑制作用的实验研究 ontheinhibitiveeffectof Study acid onhumanTenon polylacticnanoparticles invitro fibroblast