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NK细胞对乳腺癌细胞株体外杀伤作用 摘 要 目的：探寻经免疫磁珠分选纯化的原代NK细胞体外长期培养、大量增殖的条件； 研究HLA半相合的异基因NK细胞对实体瘤乳腺癌细胞株的体外杀伤作用，以及 NK细胞表面的NKG2D受体及其相对应的、表达于肿瘤细胞表面的MIC配体的表 达水平与该肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性之间的关系。 方法：1，取健康成年人外周血lOml，Ficoll法分离获取单个核细胞，培养于6 免疫磁珠分选试剂盒提取高纯度NK细胞。2．将EB病毒株B95—8细胞常规培养 14天，分别于第7天和第14天收集培养上清。将PBMCs与此含有病毒的上清共 为20％，CyA为20¨g／ml，培养于96孔板，根据细胞生长情况每3-4天换液一 次，4周后收获EB病毒转化的B淋巴母细胞样细胞(EBV—LCLs)，作为NK长期 浓度分别为lOOu／mL和500u／mL cell IL～2的SCGM(stemgrowthmedium)q1长期 方法检测肿瘤细胞HLA—Cw位点和NK细胞KIR位点表达，根据检测结果，分别将 的杀伤率，以对NK细胞敏感的红白血病细胞株K562作为对照组。5．RT—PCR方 法检测NK细胞表达NKG2D水平，了解其在与肿瘤细胞共培养前后表达水平的变 化，以及乳腺癌细胞表达MICA水平与NK细胞对乳腺癌细胞的杀伤率的关系。 结果：1．MAC$系统分选出的NK细胞，经流式细胞仪检测，CD3‘CD56+细胞的比例 (9 中培养NK细胞，比较了培养2周、3周、4周的NK细胞，其杀伤活力与新鲜分离的 NK细胞相比并无显著下降；不同浓度IL一2对NK细胞增殖d的影响并无显著的统计 学意义。2．KIR／HLA—Cw相合组的NK细胞对乳腺癌细胞株的杀伤率明显高于 KIR／HLA—Cw不相合组，两组比较差异具有显著性(p0．05)。乳腺癌细胞表面 MICA的表达水平较高的时候，则NK细胞对其的杀伤率也较高。 结论：1．使用饲养细胞EBV—LCLs培养原代NK细胞，可进行体外长期培养，细胞 活力不下降。2．NK细胞的KIR位点与实体瘤细胞的HLA-Cw位点相合组，NK细胞 对瘤细胞的杀伤率明显高于HLA不相合组。3．肿瘤细胞表面表达的MIC分子水 平和它对NK细胞的敏感性有关，肿瘤细胞表面的MICA分子可上调NK细胞表面 NKG2D的表达，激发NK细胞对肿瘤细胞的细胞毒效应。 NKG2 关键词：肿瘤免疫乳腺癌NK细胞KIR MIC过继免疫实体瘤生 物治疗原代培养体外增殖扩增 cells naturalkiller Effectsof celllinesinvitro on breastcancer killing Abstract most conditionsof and of To the optimal culturingproliferation investigate Objective NK fromPBMCs immumomagnetic cells bynegativedepletionusing purified KIRonNKcellsandHLA-Cw tO therelationsbetween microbeads；and investigate cell haveenhanced onthe