基因工程操作复习.ppt

非编码区 非编码区 编码区 RNA聚合酶结合位点 外显子 内含子 终止子 基因的结构 启动子 原核 真核 直接分离法 供体细胞中的DNA 许多DNA片段 运载体 限制酶 受体细胞 产生特定性状 导入 外源DNA扩增 目的基因 分离 (鸟枪法) 多用于原核生物 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 基因的核苷酸序列 目的基因 化学合成 推测 推测 人工合成法： 化学法合成的目的基因含内含子、启动子和终止子吗？ 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与载体连接 重组载体 基因组文库 导入受体菌中储存 基因组文库的构建 1.构建基因组DNA文库时，首先应分离细胞的 A、染色体DNA?? B、线粒体DNA C、总mRNA?? D、tRNA 2.目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库的描述正确的是 A、某生物的全套基因就是一个基因文库 B、将含有某种生物不同的许多DNA片段，导入某个生物体内，则这个生物就是一个基因文库 C、含有一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文库 D、含有一种生物的一部分基因的基因文库叫cDNA文库 A C 提取某种生物的某器官或特定发育时期的mRNA 单链DNA 双链cDNA片段 重组载体 与载体连接 cDNA文库 反（逆）转录酶 DNA聚合酶 导入受体菌中储存 cDNA文库的构建-----逆转录法： 编码区 非编码区 非编码区 DNA聚合酶 有关的酶 RNA聚合酶 mRNA前体 mRNA 单链DNA cDNA 逆转录酶 转录 剪接 逆转录 复制 启动子 终止子 基因 不含非编码系列。即不含非编码区和内含子 真核生物的基因用逆转录法得到的cDNA与原基因相同吗？有哪些差异？原核生物基因呢？ 思考？ 培养 培养 培养 导入 含目的基因的重组质粒导入大肠杆菌 含有氨苄青霉素 的完全培养基 含有四环素的完全培养基 两种培养基均不能生长大肠杆菌 Ca2+ 处理细胞形成感受态细胞 检测 （培养不具有氨苄青霉素 抗性基因和四环素抗性积基因的大肠杆菌） 只有氨苄青霉素抗性基因质粒 只具有氨苄青霉素抗性基因大肠杆菌 不具有氨苄青霉素 抗性基因和四环素抗性积基因的大肠杆菌 完全培养基 导入 接种培养 接种培养 接种培养 含有四环素的完全培养基 完全培养基 大肠杆菌不含抗四环素基因 证明： 不存活 含有四环素的完全培养基 证明： 大肠杆菌的受体细胞含有目的基因 四环素抗性基因 四环素抗性基因 存活 如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来？ 存活 导入 接种培养 接种培养 接种培养 接种培养 含有四环素的完全培养基 完全培养基 大肠杆菌不含抗四环素基因 证明： 不存活 含有四环素的完全培养基 证明： 大肠杆菌含抗四环素基因 证明： 大肠杆菌的受体细胞含有目的基因 四环素抗性基因 四环素抗性基因 完全培养基 存活 如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来？ 5.目的基因与运载体结合所需的条件有 ①同一种限制酶 ②具有抗性基因的质粒 ③RNA聚合酶 ④目的基因 ⑤DNA连接酶 ⑥四种脱氧核苷酸 ⑦ATP A．①②③④⑤⑥⑦ B．①②④⑤⑥⑦ C．①②③④⑤ D．①②④⑤⑦ 6.（多选）一个基因表达载体的构建应包括 A．目的基因 B．启动子 C．终止子 D．标记基因 ABCD D 7.下列关于基因表达载体的叙述不正确的是 A．启动子是与RNA聚合酶识别和结合的部位，是起始密码 B．启动子和终止子都是特殊结构的DNA短片段，对mRNA的转录起调控作用 C．标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因从而便于筛选 D．基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同而有所差别 A 练习1：(2008理综山东卷)为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （1）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的 处，DNA连接酶作用于 处。（填“a”或“b”） 练习1：(2008理综山东卷)为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和 法。 （3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用 技术，该技术的核心是 和 。 （4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既