杂色曲霉素对机免疫细胞影响的实验研究.pdf

中文摘要 杂色曲霉素对机体免疫细胞影响的实验研究 摘 要 是杂色曲霉(Aspergillus nidulans) 等真菌产生的毒性代谢产物。在粮食和饲料中的污染非常普遍，甚至 在潮湿居所的地毯灰尘中也可检出杂色曲霉素的污染。研究表明，在 我国食管癌高发区居民饮食中ST也是主要污染霉菌毒素之一。 近年来，一些真菌毒素对人或动物的免疫机能，特别是对细胞因 子分泌和表达的影响引起了学术界的关注。真菌毒素对机体免疫机能 的影响可以表现在许多方面，如：吞噬细胞的吞噬能力及提呈抗原能 力；淋巴细胞识别抗原的能力；T、B细胞增殖活化：或免疫效应介质 的产生(细胞毒T细胞、抗体产生等)等方面。细胞因子可直接地或 间接地影响到上述的每一个过程。由于细胞因子在免疫细胞间充当信 号联络作用，是免疫细胞在功能上相互联络的“语言”之一。通过这种“语 言”，整个免疫系统才能协调一致。因此，研究巨噬细胞及淋巴细胞所 分泌细胞因子的作用是揭示免疫应答本质的一种重要手段。 目前国内外有关ST的研究多侧重于产毒的分子机制、污染现状和 致癌性研究方面，而有关ST对机体免疫机能影响的研究很少。本研究 组进行的初步研究表明，ST对体外培养的人外周血单个核细胞(human bloodmononuclear peripheral 素．2(IL．2)的分泌有一定的抑制作用。 为进一步了解ST对免疫细胞重要细胞因子的表达以及对抗原加 Western Blot以及流式细胞光度术等方法探讨了ST对小鼠脾细胞和腹 在mRNA和蛋白水平上的影响；研究了ST对人外周血单个核细胞表 面人白细胞抗原I类分子(human I，HLA．I)以及 leucocyteantigen associatedwith 抗原加工相关转运子一l(transporter antigenprocessing， 中文摘要 表达的作用。本研究旨在从不同角度了解ST对机体免疫系统的可能影 响，揭示ST暴露在我国食管癌高发区肿瘤发生发展中的可能作用。 方法： l小鼠脾细胞IL-2、IFN-y及IL4表达和分泌的检测 将BALB／c小鼠脱颈致死，浸泡于75％酒精中，无菌取其脾脏， 剪碎并过200目铜网，用RPMI一1640培养液冲洗，收集含脾细胞的培 养液，滴加适量蒸馏水以破坏红细胞，1500r／min，离心10min，沉淀 液调整为所需浓度。按5×106个细胞／mL的浓度接种于含lO％胎 液中，37℃，5％C02培养。细胞培养12h后，随机分为6组，于 培养液中加入ST生理盐水溶解液，使其终浓度分别为0。125 mg／L、0．25 mg／L、O．5mg／L、1mg／L和2mg／L，对照组加入等容量的生理盐水。 入ConA，使其终浓度为10煺／mL，继续培养24h，离心收集细胞及培 及IL．4 mRNA的表达，并用双抗体夹心ELISA法检测细胞培养上清中 lL．2、IFN—v及IL。4在蛋白水平的表达。 2小鼠腹腔巨噬细胞IL．12和IL一6表达和分泌的检测 实验前3天，用石蜡油腹腔注射BALB／c小鼠，2001．tL／只。于第4 天将小鼠脱颈致死，浸泡于75％酒精中，用10mL冰冷的无血清RPMI。 1640培养液灌洗腹腔，无菌收集腹腔渗出细胞。计数细胞数后，按5×106 RPMI．1 640培养液中，37℃、5％C02培养2小时以使巨噬细胞贴壁。 弃去培养上清以除去非黏附细胞，加入已在37℃、5％CO，中预平衡l 小时的新鲜的完全RPMI．1640培养液，继续培养12h后，随机分为6 组，于培养液中加入ST生理盐水溶解液，使其终浓度分别为0．125 mg／L、O．25mg／L、O．5 mg／L和2mg／L，对照组加入