血管内皮生长因与内皮抑素在高氧肺损伤早产鼠肺组织中的变化及意义.pdf

血管内皮生长因子与内皮抑素在高氧肺损伤早产鼠肺组织 中的变化及意义 中文摘要 【目的】 本研究拟以早产SD大鼠为研究对象，观察早产新生鼠在高氧条件下不同时 间点肺的形态学变化，同时检测肺组织血管内皮生长因子及内皮抑素表达的动态 变化，旨在探讨在高氧过程中，内皮抑素可能发挥的作用及内皮抑素与肺泡发育、 肺损伤的关系，为下一步血管内皮生长因子、内皮抑素与早产儿肺疾病关系的临 床研究提供理论基础和依据。 【方法】 1．早产鼠高氧肺损伤模型的制备：将SD大鼠雌雄按3：1傍晚合笼交配，次 日晨取雌鼠阴道分泌物涂片，镜检见精子，当日记为妊娠第1天(足月为22天) 或次日见阴道栓记为妊娠第1天，所有孕鼠以灯光：黑暗12h：12h交替循环，给予自 由饮食和饮水。雌鼠于孕2l天时，剖宫产取出胎鼠，作为早产鼠。高氧组持续输 ％．70％，每天开箱l小时，添加水及饲料，更换垫料。空气组置于空气中(Fi02 为2l％)，饲养条件与高氧组相同。空气组和高氧组的代乳鼠每天交换，以免因 高氧引起喂养能力下降。 2．实验分组及取材：新生鼠生后雌雄不分，12小时内随机分为空气组和高 氧组，分组后4天、7天、14天将动物断颈处死取肺标本，每时间点每组8只。 右肺组织取出用PBS冲洗后立即置于液氮罐中，置．80℃冰箱保存以作Wrest锄 blot之用；左肺组织冲洗后置入4％多聚甲醛中浸泡18～24小时固定，石蜡包埋 后切片供组织学检查。 3．进行肺组织大体病理分级及肺损伤病理评分，普通显微镜下观察大鼠肺 alveol盯co帅ts，RAC)。每 组织的形态学变化，并计算辐射状肺泡计数(Radial 个标本随机选取1张切片，每张切片取10次计数，取平均值。 4．采用wrest锄b10t检测肺组织中血管内皮生长因子及内皮抑素的蛋白表 达。 【结果】 1．早产大鼠肺组织形态学检查 空气组大鼠随着日龄增长，肺发育逐渐成熟。生后4天肺尚处于囊泡期，肺 间隔很厚，7天出现肺泡化，肺泡大小均一，肺间隔仍较厚，14天肺泡化成熟， 肺间隔明显变薄。 高氧组大体病理分级提示随着时间的延长，损伤加重(，=17．96，PO．0001)， 肺损伤病理评分也提示随着时间的延长，损伤加重(仁15．80，氏0．0001)。 空气组随日龄增加肺泡计数增多，差异有统计学意义(脚．03，卢O．0003)， 高氧组随R龄增加肺泡计数也增多，差异有统计学意义(弘13．25，P0．O001)。 空气组4天肺泡计数多于高氧组4天，差异有统计学意义(户7．1，尸O．0001)， 空气组7天肺泡计数多于高氧组7天，差异有统计学意义(卢8，P．(O．o001)。 2．VEGF的蛋白表达：空气组4天、7天VEGF蛋白含量明显高于14天， 差异有统计学意义(庐22．17，氏O．0001)；4天时空气组VEGF蛋白的含量高 的含量高于高氧组，差异有统计学意义(户10．78，尸=0．0085)。 3．ES的蛋白表达：空气组4天ES蛋白的含量高于14天、7天，差异有统 计学意义(p15．04，氏0．0001)；4天时ES蛋白的含量空气组高于高氧组，差 异有统计学意义(卢6．69，P：O．0026)。 4．VEGF、ES的比值与肺泡计数的关系：肺泡发育早期，比值升高，肺泡 发育成熟后，两者比值下降趋于平衡；高氧组，二者含量下降，比值无明显变化。 【结论】 1．在早产鼠肺发育早期，VEGF分泌占优势，肺泡发育成熟后，VEGFES分 泌减少，二者比值下降；VEGF与ES在蛋白表达水平有正相关性。 2． 高氧使VEGF、ES表达下降，但VEGF分泌仍占优势，VEGFES比值下降， 可作为肺损伤的标志之一。 【关键词】高氧；肺损伤；血管内皮生长因子；内皮抑素；早产 ofVascularEndotheⅡalGrowthFactorandEndostatinin Expression Premature Hyperoxia—exposed Rats’Lung