rhtrail合aslt;,2gt;olt;,3gt;治疗胃癌的实验研究.pdf

rhTRAIL联合As203治疗胃癌的实验研究博士掌位论文 rhTRAIL联合As203治疗胃癌的实验研究 中山大学附属第二医院消化科 博士学位申请人仲飞 导师 朱兆华教授 摘 要 研究背景 细胞凋亡的异常减少是肿瘤发生发展的重要特征，因此促使肿瘤细胞凋亡被 认为是治疗肿瘤的有效手段。经典的凋亡途径包括；线粒体通路(内源性途径) 和死亡受体通路(外源性途径)，大多数抗癌药物是通过上述途径诱导肿瘤细胞 凋亡从而发挥治疗作用的。 NecrosisFactor-related 肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(Tumor Apoptosis—inducingLigand，TRAIL)是肿瘤坏死因子家族新成员，属于II型膜 糖蛋白。它的细胞外部分被特定的酶降解后形成可溶性分子，能与靶细胞表面的 死亡受体特异性结合诱导多种组织来源的转化细胞株及肿瘤细胞株凋亡，同时对 正常细胞的影响较小，因而是广受瞩目的潜在的肿瘤治疗手段。尽管在多项体内 外研究中展现了良好的应用前景，但TRAIL作为抗癌药物仍然面临两个问题：一 方面，TRAIL仍然面临着化疗药物普遍存在的耐药性难题；另一方面，当TRAIL 超过一定浓度后，将丧失对肿瘤细胞的选择性杀伤作用，诱导正常细胞凋亡而带 来副作用。与此同时，越来越多的报道显示，多种化疗药物可以增加肿瘤细胞对 TRAIL的敏感性，在不增加毒性作用的前提下提高疗效。因此，探索高效的TRAIL 配伍使用方案具有重要的意义。 已有的研究表明：As203可以直接作用于线粒体通透性转运孔道(MPTP)蛋白 质巯基，促使线粒体电位下降，进而导致细胞凋亡。As203直接损伤线粒体从而 启动细胞凋亡程序的特点使其避开凋亡通路上线粒体上游的环节，减少了耐药的 发生，因此对许多耐药模型有效。 rhTRAIL联合As203治疗胃癌的实验研究博士掌位论文 研究目的 研究As。0。与rhTRAIL这个配伍用药方案对体外培养的胃癌细胞生长与凋亡 的影响，并研究其发生机制，旨在探索胃癌治疗新方案。 研究方法 lAs203与rhTRAIL抗胃癌细胞SGc790l的协同作用 @MTT法检测细胞生长抑制率，计算出两药的I％值； 荧光染色法)； ladder出现； ④琼脂糖凝胶电泳分析肿瘤细胞内生化指标的变化，看是否有DNA ⑤用AnnexinV-FITC和PI双染色流式细胞术定量检测细胞凋亡； 处理SGC7901细胞。根据金正均方法判断药物相互作用效应； 2线粒体途径参与rhTRAIL与As203诱导胃癌细胞SGC7901凋亡 v m)的变化； (1)DiOC6荧光染色流式细胞术检测各组细胞线粒体跨膜电位(A @)AnnexinV-FITC和PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡； ⑧比色法检测各组细胞Caspase一8、9活性。 3As203对SGC7901细胞TRAIL死亡受体及cFLIP基因表达的影响 ①半定量RT-PCR和Western eFLIP(cFLIPL，cFLIPs)基因在mRNA和蛋白水平的表达； 死亡受体的表达。 研究结果 1As：0。与rhTRAIL抗胃癌细胞SGC7901的协同作用 p 的生长，两药处理72h的I％分别为15．17IJ．mol／L和384．35g／L； 显微镜下显示凋亡细胞特有的染色质变化征象； h后，提取细胞DNA行琼脂糖电泳分 ③一定浓度的As203和dlTRAIL作用48 11 rhTRAIL联合As203治疗胃癌的实验研究博士掌位论文 析，呈现出细胞凋亡时典型的DNA梯状条带：