丁苯酞注射液对性脑低灌注大鼠脑自由基代谢及parp蛋白表达的影响.pdfVIP

中文摘要 丁苯酞注射液对慢性脑低灌注大鼠 脑自由基代谢及海马PARP表达的影响 摘 要 目的：慢性脑低灌注是血管性痴呆(vasculardementia， VD)、阿尔茨海默病(Alzheimers 病等多种疾病发展过程中的一个共同病理过程。是指由高血 压、脑动脉硬化引起的脑动脉狭窄所致的脑组织灌注长期低 于生理阈值而出现的神经系统损害的一种病理状态。慢性脑 低灌注作为神经系统的一种常见病理状态，存在于脑动脉硬 疾病的病理过程中，发病早期以认知功能损害为主要表现， 最终可导致持久或进展性的认知与神经功能障碍。在我国， VD是老年期痴呆的主要组成部分。VD不仅严重损害患者的 健康及生存质量，也给社会和家庭带来沉重的负担。目前， VD的发病机制尚不十分清楚，也无特殊有效的治疗方法， 因此探讨VD的发病机理，制定合理的治疗方案，是医学领 域研究的重要课题。 目前认为慢性脑低灌注是VD的主要原因。有研究表明， 在低灌注状态及低代谢状态下认知功能可发生减退，而脑部 氧化活性的改变可能是低灌注时产生脑实质和脑微血管系 统损害的重要机制。大量研究表明，氧化损伤在脑缺血后神 经元损伤中起到了关键作用。自由基增多，其清除剂超氧化 物岐化酶(SOD)下降，脂质过氧化物增多，其毒性代谢产物 丙二醛(MDA)也相应升高，氧自由基的产生导致DNA链断裂， 中文摘要 从而激活PARP的活性，活化的PARP在缺血性脑损伤中起 重要作用作用。它刺激NAD+耗竭，从而导致ATP耗竭和细 胞死亡。学者认为过氧化反应及自由基介导的DNA损伤是 由于PARP被激活所致。越来越多的证据表明PARP过度激 活在细胞氧化性损伤中起关键作用。 丁苯酞注射液是从芹菜种子中分离出的化学成分，具有 较强的抗脑缺血作用，可阻断缺血性脑血管病所致脑损伤的 多个病理环节，本品可通过降低花生四烯酸含量，提高脑血 管内皮NO和PGl2的水平，抑制谷氨酸的释放，降低细胞 内钙浓度，抑制自由基和提高抗氧化酶活性等机制而产生药 效作用。但国内有关丁苯酞注射液神经保护作用的大部分研 究都集中在急性脑缺血模型，有关丁苯酞注射液作用于慢性 脑缺血模型的实验研究报道尚缺乏 永久结扎术，假手术组大鼠除不结扎双侧颈总动脉外，余处 理同生理盐水组和丁苯酞注射液组。丁苯酞注射液大剂量组 手术第4周后腹腔注射丁苯酞注射液， 小剂量组手术第4周 后腹腔注射丁苯酞注射液，均为每日二次，生理盐水组腹腔 注射等剂量生理盐水，假手术组不给药，连续给予四周。各 组大鼠术后分别在各时间点水迷宫测试后断头，在冰盘上快 速取脑，去除脑干及小脑，置0--,40C生理盐水中漂洗，除去 血液，滤纸拭干。视交叉后lmm及4mm冠状切开脑组织，取 中间切块为海马组织，系列固定、脱水、浸蜡、包埋制成石 中文摘要 蜡切片，行HE染色和免疫组化染色观察海马病理变化和海马 PARP蛋白表达变化。取视交叉前脑组织分别检测SOD活力 和MDA含量。运用sPss13．0统计软件进行单因素方差分析， 采用LSD．t检验进行各组间的两两比较，P0．05表示有统计 学意义。 结果：(1)各组大鼠存活情况：假手术组死亡9只，生理 盐水组死亡12只，死亡率分别为45％和60％。丁苯酞注射 液大、小剂量组各死亡11只，死亡率为55％。各组存活大 鼠作为研究对象。(2)水迷宫试验：生理盐水组大鼠学习、 记忆成绩显著下降，表现为寻找平台潜伏期时间延长，明显 高于假手术组(氏O．05)，丁苯酞注射液大、小剂量组分别 与生理盐水组比较，学习、记忆成绩均显著改善(PO．05)， 与假手术组相比，丁苯酞注射液组仍有所下降(氏O．05)， 丁苯酞注射液大剂量组与丁苯酞注射液小剂量组比较，学 手术组大鼠海马CAl：区锥体细胞排列较致密整齐，胞浆内尼 氏体丰富，核大而圆，核仁明显，偶有神经元细胞变性和坏 死；相比之下，生理盐水组大鼠海马CAl区锥体细胞排列松 散，层次不清，有细胞缺失现象，出现炎性细胞浸润，胞体 变小，核固缩，胞质浓染，丁苯酞大、小剂量组神经元变性、 死亡较生理盐水组减轻，正常神经元数目较生理盐水组多； 丁苯酞小剂量组较大剂量组神经元细胞缺失、核固缩现象更 CAl区仅见极少量阳性神经元；生理盐水组可见大量阳性神 经元意义，排列松散，胞体变小，核固缩，阳性细胞