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体外激活的免疫增强细胞对于 放化疗所导致骨髓抑制的恢复作用 博士研究生：李工 指导教师：张积仁教授王晓怀教授 摘要 背景： 目前恶性肿瘤已成为严重危害人类健康的疾病，在现阶段常规的临床治疗 恶性肿瘤过程中，大部分患者曾接受或即将接受放疗及化疗。但恶性肿瘤患者 接受放化疗后，特别在长期多个化疗周期后或大剂量化疗之后，由于临床使用 的抗肿瘤药物均有不同程度的毒副作用，即药物治疗在杀伤肿瘤细胞的同时， 对正常的组织也有一定的损害，尤其常常出现不同程度的骨髓功能抑制，通常 是先出现白细胞减少，然后出现血小板降低，部分患者甚至出现贫血症状，而 骨髓抑制的出现使得治疗无法继续进行，故导致治疗失败。严重的粒细胞、血 小板减少可分别输注粒细胞和血小板，严重的贫血可输注红细胞和营养促红细 胞生成素(EPO)。除此之外，目前常用的G-CSF，GM—CSF，促红素以及IL-1l。 对轻微及中等程度的骨髓抑制情况有效果，但对于严重或长期慢性的骨髓抑制 往往无效“1。。探索刺激广谱造血功能恢复的治疗方法，在临床工作中非常需要。 我们摸索了一种通过注射体外激活免疫细胞的细胞免疫治疗方法，在放化疗所 致骨髓抑制的小鼠模型及12例临床病例取得良好的治疗效果。 第一部分 体外激活的免疫增强细胞对于放化疗所导致骨髓抑制的恢复作用 (实验研究) 目的：通过给予放化疗导致的骨髓抑制小鼠注射体外激活的免疫细胞，比 较不同注射时间、不同注射细胞数量对骨髓抑制的治疗作用，观察治疗前后血 细胞数、骨髓像、外周血干细胞动员情况的变化以及激活免疫细胞分泌的细胞 因子，研究分析其治疗严重骨髓抑制的恢复作用的可能机制。方法：(1)根据 预实验结果给予小鼠腹腔内注射1．5mg卡铂后立即给予250cGY的6MV直线加 速器的全身照射建立骨髓抑制模型，按照不同的免疫细胞、不同注射时间及注 射浓度分组，另设阴性处理组和空白对照组；(2)分离正常人外周血单个核细 胞和正常BALB／c小鼠脾脏细胞，分别进行体外培养并激活；(3)观察小鼠存活 情况，比较不同注射时间之间、不同注射细胞数量之间、治疗组与阴性对照组 及空白对照组之间的存活率；观察治疗组治疗前后血细胞数变化；检测免疫细 胞培养液中细胞因子情况；HE染色光镜下观察治疗前后骨髓像变化情况；流式 细胞仪分析比较人免疫激活细胞与rhG—CSF对小鼠外周血干细胞动员情况。结 果：(1)激活人白细胞预防组与处理组生存率分别为30％和90％，激活小鼠脾脏 细胞预防组和处理组生存率分别为20％}n100％。预防组与处理组比较P值分别 为0．010和0．010，差异均显著。(2)注射浓度为1×107细胞数的激活人白细 胞注射组与阴性对照组、空白对照组的生存率分别为90％、20％1120％，注射浓 度为1×107细胞数的激活小鼠脾脏细胞注射组与阴性对照组、空白对照组的生 存率分别为90％、10％和20％。三组之间比较P值分别为0．001和0．000，差异 非常显著。 (3)不同浓度(分别注射1×105、1×106、l×107个细胞／只／次) 的激活人白细胞处理组的生存率分别为80％、90％和100％；不同浓度(分别注射 l×105、1×106、1×107个细胞／只／次)的激活小鼠脾脏细胞处理组的生存率分 别为80％、90％和100％，各组之间比较P值分别为0．224和0．760，统计学差异 II 博士学位论文 不显著。(4)激活人白细胞处理组(1x107个细胞／次／只)与激活小鼠脾脏细胞 处理组(1x107个细胞／次／只)间比较P值0．500．无显著荠异。(5)血细胞计 数：处理后不同时间所计白细胞数、红细胞数和血小板数经重复测量方差分析 检验，F值分别为55577、56．593和96．517，P值均小于O．001，差异显著。(6) 2，IL一6，IL一8， 细胞因子：检测到的19个细胞因子当中，有7个(IL一1b，IL and Eotaxin)为非常低的分泌水平。(7)骨髓像检查：在卡铂及放射作用后2周