动脉粥样硬化兔管平滑肌细胞钙激活钾通道活性变化及川芎嗪对其作用研究.pdf

动脉粥样硬化兔血管平滑肌细胞钙激活钾通道 活性变化及川芎嗪对其作用研究 摘要 smoothmuscle 胞(vascular calcium．activated (1arge．conductance potassium 否发生了变化，从而进一步探讨其在AS时的病理生理意义。②研究 AS时VSMCBkca对JI 和分子水平进一步阐明Lig的扩血管机制。方法：1．AS模型的复制： 本实验中实验组新西兰兔喂以高脂饲料(由0．5％胆固醇+5％猪油+15％ 蛋黄粉+79．5％普通饲料组成)，3周后减去饲料中的胆固醇，再喂5周， 共8周。对照组只喂普通饲料，也喂8周。两组兔均实行单笼喂养， 周的兔模型经麻醉和抗凝处理后开胸，取胸主动脉并纵向剖开，肉眼 直接观察AS形成情况，以半定量法判断每只兔主动脉损伤程度分值 并结合光镜和电镜检查兔胸主动脉AS病变特点，对建立的AS模型进 行鉴定。3．兔胸主动脉平滑肌细胞分离：所取胸主动脉经作AS模型 鉴定后，余下的部分斜行剪成2mm一5mm的条块。将组织块放入酶液， 在37℃恒温水浴箱内振荡消化20．30分钟左右，一边消化一边将滴有 细胞悬液的玻片置于倒置相差显微镜下进行观察，当视野出现较多折 光性好的光滑细胞时终止消化，所得细胞保存于溶液2中，静置于4 inside．out patch)和内面向外式膜片f patch)记录主动脉平滑肌细胞膜卜- Bkca单通道电活动。当电极尖端与细胞膜表面形成高阻封接时，通过 改变钳制膜电压，观察并记录通道开放活性的电压依赖性。然后通过 三维操纵器迅速将电极提出液面，在空气中暴露2～3秒后，迅速放回 浴液中，即形成inside．out patch，再通过改变钳制膜电J玉，观察并记录 通道开放活性的电压依赖性。最后加入不同浓度的CaCl2溶液并记录 通道开放对Ca2+敏感性。记录完毕后用浴液对浴槽进行灌洗，在浴槽 内盛lml浴液，然后依次向浴槽内加入不同剂量的川芎嗪，浴液中的 度时对Bkca的作用。结果：1．本实验肉眼观察可见正常组胸主动脉 内膜光滑，未见AS病变：实验组兔胸主动脉可见明显的乳白色或淡黄 色斑点、脂质条纹、斑块，大小不一，有的融合成片。所取标本经切 片HE染色后，在光学显微镜下可见实验组主动脉内膜弥漫性增厚， 炎性细胞浸润，平滑肌细胞增生，泡沫细胞形成。在透射电镜下实验 组主动脉平滑肌细胞内可见大量空泡，表明VSMC吞噬大量脂质后正 逐步形成泡沫细胞。半定量法测得的实验组主动脉损伤程度分值显著 组Bkca活性的变化：在cell．attached 组和对照组的平均关闭时间(close 和250．398±17．996ms(P0．01，n=8)，开放概率(openProbability,Po) patch 下，二者的Tc为54．390±5．852ms和440．485 用：在cell．attached patch下，Lig对Bkca无明显激活作用，用药前后 通道开放概率(open Time，To)和平均关闭时间(closeTime，Tc)均无明 均开放时间(open 显变化。4．在inside．out patch下，随胞内Lig浓度的增加，Bkca的开 放概率也相应增加，呈现浓度依赖性，主要是明显缩短通道平均关闭 时间。用不含药物的浴液灌流沈脱药物后，通道活动可恢复到用药前 水平，表明Lig与作用位点呈可逆性结合。5．800ug／mlLig(膜电位+ 主动脉已形成AS，表明高脂币J|J：{固醇饮食有明显致AS作用。2．AS patch 下，Lig对Bk．ca无明显激活作用。在inside-out patch下，随胞内Lig 浓度的增加，Bkca的开放概率也相应增加，呈现浓度依赖性。4．AS 组Bkca对L