复方接骨中药对髓间充质干细胞体外增殖分化的影响及体内应用.pdfVIP

中文摘要 复方接骨中药对骨髓间充质干细胞体外 增殖分化的影响及体内应用 摘 要 目的：复方接骨巾药临床应用广泛。大量临床观察表明， 复方接骨中药确能促进骨折及骨缺损愈合。本实验通过巾药 m清药理学方法，观察复办接骨中药含药帆清对体外培养的 大鼠骨髓问充质十细胞增殖、分化的影响以及含药血清诱导 的骨髓问充质十细胞一去抗原牛松质骨复合体在大鼠体内 的成骨’潜能，旨在从细胞水平}：探讨复方接骨。}|药促进骨愈 合的作川机制，为接骨中药的理论研究和临床应用提供实验 依据。 方法：本复方接骨中药由厚朴，大黄，枳壳，桃仁，苏 木，当归，红花，骨碎补，川I断等组成，按体表面积折算为 SD大鼠的等效剂量后，按中医传统方法煎制，灌喂实验组。 等量自来水微火加热浓缩，灌喂对照组。取3月龄的雄性SD 等条件卜分别连续灌喂10口。无菌条什下，股动脉放血处死 人鼠，收集血液，室温下离心，提取血清，火活补体，制备… 含药血清及对照血清。另取体重2509的雄性SD大鼠1只断 髓法处死后无菌培养皿收取骨髓，用注射器反复拙吸后成为 培养箱培养。培养3代以后的细胞用于实验。实验纰细胞用 10％含药f『fL清+DMEM培养，对照组细胞用1o％tE-含药血清+ 中文摘要 DMEM培养基培养。每LJ丁I倒置显微镜下观察细胞生长情况 及形态变化。用MTT法检测细胞的增殖，麦胚凝集沉淀法 骨碱性磷酸酶活力测定检测细胞分化。取3月龄的雄性SD 实验组将培养分化2w的骨髓MSC消化后制成均匀的细胞悬 液，种植于预湿的去抗原牛松质骨， 370C，5％CO：培养箱 m1， 内培养4h，待细胞基本贴壁后，再加入DMEM培养液2 继续培养2h。将含药咖．清培养诱导的骨髓MSC—BCB种植]： 大鼠皮下。对照组将不含含药血清培养诱导的骨髓MSC的 单纯BCB直接种植丁．火鼠皮下。实验组与对照组分别于术 后14d和28d各取出8个植入物。取每个植入物的一半于4％ 多聚r1]醛溶液固定，石蜡包埋后切片，行HE染色，光镜下 观察。另一、卜定量后匀浆，麦胚凝集沉淀法测定BALP活性。 结果：l经MTT法证实，实验组及对照组细胞均先进入 生长缓慢的滞留阶段，该期约在传代后24～72h。在第24h两 约在传代后72～1 停止的平台期。 2实验组及对照组均是在第2w末Ⅱ’j‘BALP活力达到高 峰，第3w末开始明碾下降，在第lW末时实验组与对照组 实验组人于对照组(t=2．73 中文摘要 组无疆著性区别(t=1．856，p0．05)。 1w未，增殖细胞呈簇集生长，细胞形态以梭形为寸i，以培 养孔的周缘最为明显；培养第2w末，细胞大量增殖，密度 增商，细胞形态出现明显变化，由单一的梭形纤维状变成较 多晕的三角形、多角形、立方形细胞，完全具备成骨细胞形 为成骨细胞。培养孔内成骨细胞贴附成星形，突起向孔隙罐 延伸。培养孔周缘的细胞已连接成片，形成细胞秉替，细胞 分泌旺盛，胞体丰满，胞浆透明清晰，贴壁，卜固，纲胞突起 增多，胞体问紧密连接，细胞之间界限模糊。以后细胞生长 情况变化不火。对照组细胞培养诱导分化的成骨细胞数量、 密度明显较实验组下降，同期细胞BALP活力较低。 照组明晶不同。实验组涛导后的骨髓MSC数量较多，附于 BCB骨小梁表面上，细胞核染成蓝色，呈蚓形和椭圆形，见 到新骨发生。对照组细胞体积较大，呈梭形，有突起，个别 细胞呈三角形或多角形。骨小粱间隙町见纤维纠1织，未见新 骨发牛。统计学分析表明植入物实验组BALP活性显著高于 结论：l复方接骨中药可以促进体外培养的骨髓MSC 增殖及向成骨细胞方向分化。 合体具有体内成骨作刖。 3组方合理的接骨叶l药能够促进骨愈合。 4中药m清药理学方法口j以客观反映中药药效。 中文摘要 5本实验方法可以验证接骨中药组方的合理性及有效 性，叮把中药药效评定从普通的临床观察提高到细胞水平的 实验上。 关键词：复方接骨中药；含药血清；骨髓间充质干细