夏枯草提取物体诱导el-4细胞凋亡实验研究.pdf

郑州大学2006属倾㈠口f究生论文 夏枯争提取物体外诱导EL一彝II胞捌广实验Ⅲ宄 夏枯草提取物体外诱导EL—4细胞凋亡实验研究 研究生 郑晓珂 导师 张明智教授 王留兴教授 郑州大学第一附属医院 肿瘤科 中国河南郑州450052 摘 要 背景和目的 恶性淋巴瘤(mali盟amlymphoma，ML)是来源于网状淋巴组织且与免疫系 统密切相关的恶性肿瘤．其发病率逐年升高，已成为严重威胁人类健康的一类疾 病。它的治疗以联合化疗为主，同时辅以局部放疗和生物治疗。近年来，随着科 学技术的发展和新药的不断问世，其治愈率有了明显的提高，患者生存期有了明 显的延长。但随着原发或继发耐药的增加．有些患者出现化疗的失败，还有些患 者因化疗毒副作用较大，如出现严重的骨髓抑制而被迫中断化疗。寻求高效低毒 的治疗方法已成为肿瘤工作者急需研究的课题。近些年来中医中药已逐渐成为恶 性肿瘤综合治疗的一部分，中药不仅能提高免疫力，而且对化疗、放疗有减毒、 增敏、增效的效应。另外它还有毒副作用小，药源广泛，价格低廉等特点。最重 要的是据文献报道很多中药都具有抗肿瘤的作用。基于以上原因，世界各国都对 多种中药抗肿瘤效应及其机制进行了广泛的研究，从中提取并应用于抗肿瘤治疗 的单体越来越多，如榄香烯、喜树碱类、长春新碱、紫杉醇类等植物药已广泛 应用于I临床并取得了良好的效果。为充分利用传统药物的优势，提高恶性肿瘤的 治愈率，减轻治疗的毒副反应，进一步开发研制中药制剂已成为肿瘤工作者的重 要课题之一。夏枯草为唇形科夏枯草属植物夏枯草(PrunellaL)的干 vulgaris 燥成熟果穗，具有清火明目，软孥散结之功效。据报道它具有显著的抗肿瘤活性。 有体外癌细胞凋亡实验提示，单味药夏枯草经醇煎醇提法制成夏枯草注射液能诱 郑州人学2006扁坝Ij研究生论立 夏枯草摊墩物体外诱导El广-4细胞捌产实验研究 均有显著细胞毒作用。由此可见，夏枯草是一种很具有开发价值的抗肿瘤中草 药。在治疗淋巴瘤的许多传统方刘上，夏枯草都处于很重要的地位，然而现在关 于夏枯草对恶性淋巴瘤抗肿瘤活性的实验研究非常少，因而有必要对其在恶性淋 巴瘤的抗肿瘤活性方面加以研究。 本实验观察了经醇煎法制成的夏枯草提取物在体外对小鼠T淋巴细胞自血病 细胞株EL一4增殖的影响，并通过细胞生物学方法对夏枯草提取物诱导EL一4细 胞凋亡特点进行了初步探讨，为该细胞接种小鼠体内进行动物实验及将来的临床 应用提供实验依据。 方法： 1．应用~f11r法测定夏枯草提取物对EL广_4细胞的生长抑制率。实验分 为3组：(1)实验组：加入不同浓度的夏枯草提取物水溶液：(2)阳性对照组： 加入不同浓度的长春新碱；(3)空白对照组加同体积生理盐水。每组设4个平行 孔，另设本底对照孔。分别加入EL～4细胞培养48小时，测定生长抑制率，求 Ic。值。同时，用MTT法绘制经夏枯草提取物(30“g／ml，20ug／m1)处理的EL一4 细胞的生长曲线，同时设空白对照(加同体积的生理盐水)和阳性对照(长春新 碱30n g／m1)。 2．应用倒置显微镜，HE染色观察细胞用药后形态的改变，DNA琼脂糖 凝胶电豫法，11JNEL法检测夏枯草提取物对El厂—4细胞诱导凋亡的作用。 结果 l夏枯草提取物对Eo一细胞的增殖抑制作用 1．1夏枯草提取物对E卜。细胞的生长具有显著的抑制作用。其80Ⅱg／m1，40 p g／m1浓度的水溶液对Eb4细胞的生长抑 g／ml，20pg／Ⅲ1，15|Ig／m1，10n ±l。53％。其实验组OD值与空白对照组差异有统计学意义伊0．05)。其Ic50值为 23．67±3．05u g／ml。 u 1．2从生长曲线上看两种浓度的夏枯草提取物(30“g／m1、20