大鼠非酒精性脂肝cyp2e1和pparα的变化及甘正复方的影响.pdfVIP

大鼠非酒精性脂肪肝CYP2E1和PPARQ的变化 及甘正复方的影晌 硕士研究生：应力 指导教师：姜春萌 教授 专业名称：内科学 摘 要 目的 非酒精性脂肪性肝炎(NASH)系非酒精性脂肪性肝脏疾病 (NAFLD)发展为肝硬化的中间阶段，可能为隐源性肝硬化的重要病 因。NASH的确切发病机制尚不十分清楚，脂肪代谢障碍使肝脏脂肪 内环境失去平衡是肝脂肪变性的基础，而氧应激及脂质过氧化则对肝 脏炎症和纤维化的形成和发展起重要作用。细胞色素P4502E， 酸氧化、氧应激形成及进一步导致脂质过氧化，对促进肝脏炎症和纤 维化起重要作用。目前临床对NASH治疗效果尚不理想。本文根据中 医理论组成甘正复方，观察其对高脂饮食建立的NASH大鼠模型 CYP2E1、PPAR Q的影响，以进一步研究其治疗作用的机制。 方法1．动物模型的建立及标本采集：30只SD大鼠正常喂养1 和治疗组(n=10)喂高脂饲料，实验动物自由饮水进食。实验第13周 起开始灌胃给药。正常组和模型组以生理盐水10ml／kg鼠重灌胃，每日 一次；治疗组予甘正复方10ml／kg鼠重灌胃，每目一次。于实验16周 自下腔静脉采血后处死，迅速取出肝脏，按常规制备血清、肝匀浆、 肝组织石蜡切片标本，肝组织于一70℃低温保存。 MDA含量、SOD活性测定；光镜下评估脂肪变性和炎症活动情况；免 ·1’ 疫组化法测定CYP2E1和PPAR o表达；逆转录聚合酶链反应测定 a CYP2E1和PPARmRN／t表达。 结果 1．体重及肝／体重指数：模型组体重、肝／体重指数分别 组421．80±15．51、2．97 4-0．10％，与模型组比较明显下降(t= 9．047，9．065：P均0．01)。 2．HE染色观察：正常组大鼠肝细胞无脂肪变性；模型组普遍发生 以大泡性为主的脂肪变性；甘正复方组脂肪变性程度积分显著减轻(尸 值均0．0I)。正常组炎症活动度计分为0；模型组炎症活动度计分6．80 分2．80±1．03较模型组明显减轻(卢7．559，P0．01)。 3．免疫组化法染色： 颗粒主要分布在中央静脉周围腺泡III区，阳性率为70％；甘正复方组 显差异(P=O。287)。(2)PPARQ免疫组化法染色结果：正常组见棕 黄色颗粒主要分布在汇管区周围肝细胞胞核内；与正常组相比，模型 组PPAR a阳性表达细胞明显减少(肚0．01)；治疗组与模型组相比， PPARa阳性表达细胞增多，但二组问无统计学差异(P0．05)。 4．CYP2E1和PPARQmRNA(4值)表达： 变化：与正常组mRNA Q 0．01)。(2)PPAR 方组0．451±0．039较模型组明显升高(户一1 常组相比仍有显著差异(，=10．082，尸0．01)。 5．血清生化指标： (1)血清丙氨酸转氨酶(ALT)和门冬氨酸转 ·，’ 58， 三酯(TG)：模型组血清TC 甘正复方组TGl．02±0．1l，较模型组下降，但无明显差异(f=一1．384， P0．05)。 一1．107，1．063，0．016，尸值均0．05) 6．10显著低于模型组(f=．11．806， 正常组水平(f=一3．099，尸0．05) 有差异(t=7．814，尸0．01)。 结论 甘正复方能显著降低肝脏内甘油三酯贮存，减轻肝脏脂肪 变性，并具有明确的抗炎、抗脂质过氧化和清除氧自由基的作用。其 分子机制可能与调控CYP2E1、PPAR q等表达有关。 关键词：非酒精性脂肪性肝炎 细胞色素P4502E，