恶性淋巴瘤骨髓因重排的检测.pdfVIP

型型壁型兰塑三垦堕主兰些堕皇———一 垩丝堂曼鎏量壁墨里重苎塑丝型墨堕盎童墨 恶性淋巴瘤骨髓基因重排的检测及临床意义 研究生王海莉 导师张明智教授 樊青霞教授 郑州大学第一附属医院肿瘤科 中国河南郑州450052 摘要 背景和目的 近年来，恶性淋巴瘤(ML)的发病率逐年上升，国内非霍奇金淋巴瘤(NHLl约为 霍奇金淋巴瘤(HD)的7倍。在临床工作中，恶性淋巴瘤治疗前要作出全面诊断，包 括亚型、亚类、临床分期、有无B症状、预后分数等以利于合理地选用治疗方案和 评估预后。但是，全面诊断仍存在一些困难。一方面，目前淋巴瘤主要依靠以形态 学为主、免疫组化为辅的诊断手段，一部分病例凭此方法仍不能确定是否为淋巴瘤 及对其亚类的判断；另一方面，在分期上，恶性淋巴瘤发生骨髓浸润(BMI)者分为Iv 期，骨髓涂片是目前检测BMI的常用形态学方法，但其检出率低，假阴性率较高。 总之，常规诊断方法对NHL的准确分期、治疗的疗效评价、预后评估、是否需巩固 治疗及巩固治疗时间的判断都存在困难。因此，需要建立一套NHL诊断和治疗的综 合评估体系。 随着新的治疗方法和治疗药物的临床应用，恶性淋巴瘤的治疗效果取得了很大 进步。但仍有部分病例治疗退缩后很快复发，甚至少数病例开始即对治疗抗拒，称 为复发性或难治性淋巴瘤。复发的主要原因为体内仍残留恶性细胞，常规形态学检 查往往不能发现，被称为微小残留病灶(MRD)。需要有一种更敏感的方法来检测 MRD。 随着分子生物学的发展，从基因水平研究和分析疾病的技术逐渐应用于临床，为 淋巴瘤渗断提供了有效工具。B和T淋巴细胞从原始的胚系构型到分化成熟，由于 受外界抗原的刺激，其抗原受体(19和TCR)基园必须通过基因重{j}才能形成有功能 塑塑查兰!塑!旦竺_上兰些笙苎 垩堡堂里堕量壁苎望重堡塑垫型墨堕盎童墨 的基因。从B和T细胞群体上看，每个Ig或TCR基因重排形式各异，即每个淋巴 细胞的抗原受体基因编码完全不同。在淋巴细胞分化发育的某一阶段，一旦某一个 淋巴细胞发生恶性转化，进而单克隆增生，就会形成恶性病变，其抗原受体基因编 码即基因构型是一致的。正常人的骨髓中淋巴细胞多为成熟的淋巴细胞，为多克隆 性，其抗原受体(Ig和TCR)基因由于重排的多样性，经多聚酶链聚合方法(PCR)扩增 后，其基因片断长短不一，电泳后就会呈现弥散状(smear)。如果有淋巴瘤骨髓侵犯， 多为单克隆增生(少数为双克隆或寡克隆／亚克隆)，经PCR扩增后，电泳出现一条明 显的条带。应用PCR法可以从106个正常细胞中检测到一个恶性细胞。应用PCR技 术可对恶性淋巴瘤骨髓中浸润的少量淋巴瘤细胞进行检测，以指导临床诊断分期和 治疗、评价疗效和评估预后。 本课题通过研究非霍奇金淋巴瘤骨髓免疫球蛋白重链09H)和T细胞受体-Y (TCR—Y)基因重排，以探索其在NHL的诊断、分期、指导治疗、疗效评价及预后评 估方面的价值。 材料与方法 1标本 定病理组织学恶性程度，低度恶性7例，中、高度恶性45例。化疗前每例患者均留 取骨髓标本，共52例；临床完全缓解后留取骨髓标本共11例。 1．2 2003年6月一2004年10月初诊病理诊断不肯定或治疗过程出现疗效与病理 不符的病例骨髓标本5例，均来自郑州大学第一附属医院肿瘤科。 1．3 12例正常人外周血标本作对照。 2方法 2,1化疗前每例病例行骨髓涂片检查，同时留取骨髓2ml提取DNA进行基因重 排检测。比较两种方法阳性率差异。并对NHL早期、晚期之间，低度、中高度之间 基因重排阳性率进行比较。实验设阳性对照(B淋巴瘤细胞系Raji细胞或T淋巴瘤细 模板1。 Il 燮兰!!竺旦堡主兰些笙壅 矍竺塑里堕量壁苎里重塑塑丝型墨堕堕塞墨 及银染来检测基因重排。 2．3 PCR结果判断标准 2．3．1带宽不超过lmm，边缘整齐；