抑癌基因mxi在白血病细胞中表达和突变的研究.pdfVIP

中 文 摘 要 抑癌基因MAI在白血病细胞中 表达和突变的研究 摘 要 目的:抑癌基因Mxi-1在实体肿瘤中表达与突变的研 究日渐增多，相关结果表明其与实体肿瘤 (如神经胶质细胞 瘤、前列腺癌等)的发病关系密切。但是关于抑癌基因Mxil 在白血病细胞中表达和突变的研究在国内外尚属空白。仅 Shapiro等人的报告中提及急慢性淋巴细胞性白血病易出现 Mxil基因所在区域的倒位或缺失，但并未报道有无Mxil基 因的突变。本研究的目的在于检测抑癌基因Mxil在白血病 细胞中的表达状况和有无突变，探讨Mxil基因突变与白血 病发病的关系，阐明白血病的发病机制，为寻找新的白血病 治疗方法一转基因疗法提供理论根据。 方法:选择26例初治急性白血病 (acuteleukemia,AL) 患者、30位健康对照者和2种髓系白血病细胞株K562,KGl 为研究对象，缓解期AL患者作为自身前后对照。分别从白 血病患者的骨髓单个核细胞 (bonemarrowmononuclear cells,BMMNC)标本和健康对照者的外周血单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcells,PBMNC)标本及处于 对数生长期的K562,KG1细胞中提取总RNA。首先，我 们 应 用 逆 转 录 一聚 合 酶 链 反 应 (reverse transcription-polymerasechainreaction,RTPCR)技术分别 测定所有标本中MxilmRNA的表达情况，并对各组间Mxil mRNA 的相对表达水平进行统计学分析。之后，我们应用 中文 摘 要 单链构象多态性(singlestrandconformationpolymorphism, SSCP)分析的方法，对上述所有研究对象的Mxil基因cDNA 的SID区和bHLHZip区进行了多态性分析，以筛选异常电 泳带，并通过与正常对照者的电泳结果对比分析，初步判定 异常电泳带是由基因的多态性还是由基因突变所引起的。然 后，在聚丙烯酞胺凝胶中切割异常电泳迁移带，从中洗脱提 取DNA片段，提取的DNA片段再用相同的引物进行35个 循环的扩增。非变性扩增产物克隆入商品化的pCR2.1载体 中进一步扩增后，应用ABIPRISMDyeTerminatorCycling 测序试剂盒，在全自动核酸序列分析仪 (ABIPRISM310 automatedDNASequencer)上进行测序分析，同一标本中3 个以上的克隆中出现恒定的核营酸序列改变者确定为突变。 最后，对比分析患者Mxil基因的突变情况与患者的预后情 况，以探讨Mxil基因突变情况对患者预后的影响。 结果: 1.所有标本中均可检测到MxilmRNA的表达，正常 对照组中基因相对表达水平(Mxil/0-actin)为0.752-1.562, 平均表达水平为 0.923。初治AL患者的相对表达水平为 0.113-0.835，平均表达水平为0.531，其表达水平较正常对 照组 (0.923)明显降低，差别具有显著性，P0.05。其中 AML患者的MxilmRNA的相对表达水平为0.113-0.792, 平均表达水平为0.503;ALL患者的MxilmRNA的相对表 达水平为0.206-0.835，平均表达水平为0.623.AML患者 的平均表达水平较ALL患者的低，但经统计学分析结果无 显著性差异，P0.05。缓解期AL患者的MxilmRNA相对 表达水平为0.436-1.238，平均表达水平为0.812,其表达水 ~目.~，叫月，.~~ 一 _ z 中 文 摘 要 平较正常对照组 (0.923)低，但经统计学分析结果无显著 性差异，P0.05:与初治AL患者 (0.531)比较明显升高， 差别具有显著性，P0.05oK562细胞株中MxilmRNA相 对表达水平为0.583-0.635，平均表达水平0.613，较正常对照