大鼠脊髓损伤后髓水肿与水通道蛋白4（aqp-4）表达变化的研究.pdfVIP

中丈摘 要 大民脊位损伤后脊位水肿与水通道蛋白一4 (AQP-4)表达变化的研究 摘 要 目的:脊髓损伤后会发生不同程度的血管源性脊髓水 肿，而水肿的程度和持续的时间与继发性脊髓损伤的发生发 展密切相关，但 目前人们对脊髓水肿的分子生物学机制尚不 清楚，随近些年水通道蛋 白的发现和对其研究的深入，使人 们了解到水通道蛋白与组织水肿关系密切。本实验采用改良 Allon法川建立了大鼠脊髓损伤模型，通过大鼠急性脊髓损 伤后不同时间点的病理学改变与脊髓含水量的变化，来研究 脊髓水肿的发生发展变化规律;用免疫组化法测定正常脊髓 和在脊髓损伤后不同时间点水通道蛋白4(AQP-4)的表达 变化，来研究水通道蛋白4在脊髓内的分布特点和脊髓损伤 后的表达变化规律;以及通过损伤段脊髓不同时间点含水量 的变化与水通道蛋白4表达变化的相关性来研究水通道蛋白 4与脊髓水肿的关系，探讨脊髓损伤后脊髓水肿的分子生物 学机制。 方法:实验分两部分进行，健康SD大鼠60只，体重 250-300g，雌雄不限，随机分为两组:含水量测定组30只， 免疫组织化学测定组30只。两个组内均随机分为假手术组5 只，损伤组25只。损伤组再按脊髓损伤后6h,Id,3d,5d 和7d这5个时问点随机分为5组，每组5只。分别进行损 伤段脊髓含水量和水通道蛋白4表达的免疫组化测定。采用 改良Allon法脊髓致伤的大鼠模型，冲量为5.0x10.0.gcm, 中文摘 要 打击T12脊髓致中度损伤(2]。术后单独喂养并给予人工挤压 膀肤帮助排尿，每天两次。用干湿重法测定脊髓含水量:不 同时间点分批断头处死动物后，以损伤段为中心切取 1.0cm 脊髓，置于万分之一精度的分析用天平上称取湿质量后在 110℃电热干燥箱内干燥24h至恒质量，称取干质量，按Elliot 公式计算脊髓水含量:脊髓水含量=(湿质量一十质量)/ 湿质量X100%即得脊髓含水率。用免疫组织化学法检测脊 髓损伤后不同时间段和 AQP-4的表达:腹腔注射麻醉后心 室一主动脉灌注固定，切取伤段脊髓，系列脱水、脱脂、石 蜡包埋，连续切片，片厚Sum，分别进行苏木素一伊红(HE) 染色和免疫组织化学染色。观测指标:(1)脊髓损伤后不同时 段组织病理学变化 (HE染色)。(2)假手术组及损伤后不同时 段脊髓含水量 (%)的变化规律。(3)假手术组脊髓内AQP-4 的分布特点及脊髓损伤后不同时段AQP-4表达的变化规律 (光镜下观察、图象分析系统测定阳性区域的平均吸光度)。 结果统计采用SPSS11.0统计软件处理，所有计量资料均采 用均数士标准差表示，两样本均数比较采用t检验，脊髓含 水量测定资料与AQP-4表达测定平均吸光度资料进行相关 分析，P0.05为差异有显著性。 结果:损伤后早期即发生中央灰质灶性出血，血管周围 有红细胞、白细胞渗出，周围组织水肿，细胞间隙和血管间 隙增宽，神经元胞体肿胀。以后出血、水肿持续加重，3天 时达到顶峰，5-7天时可见出血吸收、水肿减轻、脊髓中央 液化坏死空洞形成。大鼠脊髓内AQP-4的分布特点:大部 分分布于灰质，白质内分布较少;在脊髓中央管、软脊膜以 及灰质的血管周围有着极性分布。主要分布在神经胶质细 中丈摘 妥 胞、中央管膜细胞和软脊膜细胞，特别是在血管、中央管、 软脊膜周围的胶质细胞膜上分布最多，神经元未见有分布。 大鼠脊髓损伤后 6小时，脊髓含水量较正常组明显增加 (P0.01)I损伤段脊髓AQP-4的表达也明显增加(P0.01); 损伤后3d损伤段脊髓含水量达高峰，与正常组比较差异有 显著性 (p0.01),损伤段脊髓AQP-4的表达亦达到高峰， 与正常组比较有显著差异 (p0.01);脊髓损伤后5d损伤段 脊髓含水量和AQP-4的表达较3d时均有所下降，但与正常 组比较仍有明显差异 (p0.01);损伤后7d的大鼠脊髓含水 量和伤段脊髓AQP-4的表达较5d时均继续下降，但仍高于 正常 (P0.01);大鼠脊髓损伤后不同时间点AQP-4蛋白的 表达 (平均吸光度)和脊髓含水量 (%)呈显著正相关。 (r--0.964). 结论:(1)建立改良Allen