晶状体上皮细胞化损伤模型中酸性β—葡萄糖苷酶和鞘脂酶激活蛋白c的表达.pdfVIP

晶状体上皮细胞氧化损伤模型中酸性B一葡萄糖苷酶和鞘脂酶激活蛋白c的表达 中文摘要 晶状体上皮细胞氧化损伤模型中酸性B一葡萄糖苷 酶和鞘脂酶激活蛋白C的表达 专 业： 眼科学 硕士研究生： 李秀梅 导 师： 张振平教授 摘要 多种因素共同作用导致白内障形成，在此过程中几个事件联合起来共同诱导 晶状体一系列的病理生理学改变，包括晶状体上皮细胞、纤维细胞膜成分和通透 性改变、水电解质紊乱、晶状体蛋白质翻译后修饰及细胞凋亡途径启动等等，最 终导致晶状体混浊。动物的体内及体外试验和临床研究有力显示：氧化损伤的加 重和白内障的发展有关，在形成白内障的反应链中，～般认为氧自由基造成的损 伤作为启动因素触发后续一系列反应。本文针对体外培养的人晶状体上皮细胞系 HLE—B3细胞，用一定浓度的过氧化氢(H202)作用于细胞构建氧化损伤模型， 然后以半定量RT—PcR和免疫细胞化学的方法检测细胞中的酸性13一葡萄糖苷酶 C)的含量变化，旨在探讨此两种 (GCase)和鞘脂酶激活蛋白C(Saposin 与晶状体上皮细胞膜上脂质构成密切相关的物质是否与氧化应激过程相关，进一 步探寻白内障形成机制的线索。研究共分4部分，简述如下。 第1部分H202诱导人晶状体上皮细胞氧化损伤模型的建立 目的：研究不同浓度H202对人晶状体上皮细胞系HLE--B3生长抑制及对细胞 形态学的影响，确定体外氧化损伤模型适宜的H202浓度。 晶状体上皮细胞氧化损伤模型中酸性B一葡萄糖苷酶和鞘脂酶激活蛋白C的表达 中文摘要 于细胞24小时，用卜1TT法检测不同浓度下细胞的抑制率。显微镜下观察氧化应 激状态下细胞的形态学改变。 H202 处理使细胞增殖受抑制，细胞形态改变。 结论：Hz02抑制人晶状体上皮细胞系HLE—B3的增殖，抑制率呈现剂量依赖性； ICso为800pM。 的表达 目的：研究体外培养的正常人晶状体上皮细胞和氧化应激下人品状体上皮细胞中 GBA和Prosaposin基因在mRNA水平的表达情况。 方法：800pMH202分别作用于人晶状体上皮细胞系HLE—B324，48，72小时。 情况。 rnRNA表达在24h和 结果：GBA在24h时表达量即有明显降低；Prosaposin 48h均没有明显改变，而在72h时表达明显增强。 mRNA转录减少，在24h 结论：800pM过氧化氢处理晶状体上皮细胞后，GBA mRNA转录增加。 即达最低：过氧化氢处理72h后始见Prosaposin C在晶状体上皮细胞中的 第3部分免疫细胞化学法检测GCase和Saposin 表达 C在晶状体上皮细胞中的表达。 目的：探讨GCase和Saposin 方法：800pM C的表达。 H202作用72小时后免疫细胞化学法检测Saposin 结果：HLE—B3细胞浆内两种蛋白均有表达，在上述处理下GCase的表达降低， C的表达升高。 Saposin C上调。 结论：氧化