分子标记辅助育种前沿讲座精要.ppt

CMS-T-F: 5’-CAT GAA ATG GGT GAA GTC TCT TTC-3’ CMS-T-R: 5’-AAG AGA AAG GGA GAC TTT GGT CCC-3’ CMS-C-F: 5’-ATG CTA ATG GTG TTC CGA TTC C-3’ CMS-C-R: 5’-AGC ATC ATC CAC ATT CGC TAG-3’ CMS-S-F: 5’-CAA CTT ATT ACG AGG CTG ATG C-3’ CMS-S-R: 5’-AGT TCG TCC CAT ATA CCC GTA C-3’ 根据玉米不育系线粒体DNA的R区重复序列，分别设计了玉米T、C和S三种不育胞质的特定引物，可以通过PCR的方法准确鉴定杂交种中不育胞质杂交种的类型及比例。 * C型不育胞质杂交种农大3138的鉴定 C型不育胞质农大3138 正常胞质杂交种农大3138 * 分子标记在杂种优势研究中的应用 * * 王庆东（2003）利用SSR标记将16个玉米自交系分成8个类，分别为唐四平头群 （黄早4、K12 ） ， Reid群 （掖478和郑58 ） ， 旅大红骨群（丹340、郑22）、 Lancaster群 （ Mo17 ） ，自330群（自330）、 综合种选系（ N808和综3 ） ，亚热带种质（ Pop49、8085 ）以及温热群 （豫87-1、豫87-3、P138、许178 ） 。 分子标记在玉米杂种优势类群中的应用 * 16个常用玉米自交系的聚类图 * Pop49 8085 87-1 87-3 p138 许178 808 综3 丹340 Mo17 HZ32 K12 黄早4 478 郑58 郑22 利用特殊配合力对16个自交系进行分类结果 * 基于SSR分子标记遗传距离的聚类结果 * 85个自交系SSR分子标记分群结果 Classification of heterotic groups among 87 inbreds 杂种优势群 Reid Lan-caster 自330 Zi330 唐四平 头 温热 I Tr-Te I E28群 其他 Total No. 21 12 14 24 12 3 2 * 我国目前玉米生产上利用的九种主要 杂种优势模式： Reid×温热I Reid×自330 Reid×唐四平头 Reid×旅大红骨。 Lancaster×唐四平头 自330×Lancaster Lancaster×旅大红骨 Reid×Lancaster 自330×温热I * 分子标记的杂合度与杂种优势的关系 利用豫玉22号的294个重组近交系，通过3次两两随机交配的方式组配成441个“永久F2”；选用221个亲本（综3和87－1）存在多态性的SSR标记对294个重组近交系进行多态性分析，同时对永久F2群体进行田间鉴定，结果表明：亲本的杂合度与永久F2杂交种的产量不存在显著的相关关系。 * 分子标记用于转基因作物后代 的选择与检测 * * 转Bt基因玉米的PCR检测结果 转基因亲本的Southern检测结果 1：MK；2：CK+，Bt质粒；3：CK-；4-13：转基因亲本 * 分子育种学 分子标记技术 转基因技术 常规育种技术 经验、机遇 科学、技术 * 思考题 1、何谓遗传图谱？ 2、简述RFLP、RAPD、STS、SSR、AFLP标记的原理和特点。 3、DNA分子标记应用。 4、DNA分子标记辅助育种的原理和方法，以及它的优点。 * 谢 谢！ * * * * * * （一）、多重PCR法 技术原理：即利用多对引物在同一反应条件下同时进行PCR扩增。 应用条件： 多个以PCR反应为基础的分子标记与目标性状紧密连锁； 各个分子标记的扩增产物具有不同分子量大小； 各引物的复性温度必须相匹配； Taq酶量与一个引物用量必须相同。 优点：降低成本，节约筛选时间，提高选择效率。 * 实例： 如Ribaut等将筛选到的与热带玉米抗旱有关的QTL连锁的1个STS和两个SSR标记进行多重扩增用于MAS选择，以改良耐旱性。两人仅用了一个月时间就从BC2F1的2300个单株中选出300个目标单株。 * （二）、相斥相分子标记选择法 技术原理：即利用与目标性状相斥连锁的分子标记进行辅助选择。所谓相斥连锁即有分子标记，植株不表现目标性状；无分子标记，植株表现目标性状。 适用范围：在显性标记如RAPD、AFLP、STS、ISSR上应用效果特别显著。 原因：通过相斥标记的选择，可将群体中含标记的不含目标性状的纯合体和含目标性状