二氧化硅介导的胞DNA损伤及其影响因素的研究.pdfVIP

=氧化氆介导的细胞DNA损伤及其影响因素的研：究 浙江大学医学院 劳动卫生与环境卫生学 98级硕士研究生 余晨 导师 曾昭玉 摘要 如胸目砂一 尘肺是我国最严重的职业病，其中又以矽肺的发病率最高。f矽肺 是由二氧化硅(Si02)粉尘引起的以肺纤维化为主的不可逆性进展的 疾病，其致病过程的分子机理仍不清楚。国际癌症研究机构(IARC) I)，但【司时指出 于1996年10月正式宣布矽尘是人类致癌物(Group 尚需人类DNA水平的直接证据。因此，矽尘、矽肺与肺癌间的关系 问题仍是职业医学界密切关注的问题。近几年来，彗星试验(单细胞 凝胶电泳)作为一种快速、简便和灵敏的检测单个细胞DNA断裂的 技术，广泛应用于遗传毒理、放射生物学、生物监测等领域。J为研究 小剂量sio对DNA的损伤作用及其影响因素，我们用彗星试验检测 Hamster sio粉尘对中国仓鼠肺成纤维细胞(ChineseFibroblast， Lung mink I normal CHL)和正常貂肺I型上皮细胞系(A type lung epithelial 粉尘损伤的剂量．效应关系。并通过去铁胺(deferoxamine，DⅨ)和 radical，·OH)和细胞外钙离子内流对DNA 产生的羟自由基(hydroxyl 损伤的影响， 材料与方法 ，-E，jIl、、 采用CHL成纤维细胞株和CCL一64正常貂肺I型上皮细胞株进 行体外试验。以Si02粉尘不同的作用浓度(分为01ag／ml、7．5I_tg／ml、 2h)来观察DNA损伤，并观察了在一定SiO：粉尘浓度(90斗咖d，2h) mM、1．0 mM、O．5 mM、2．0mM)和Ver 下，系列浓度的DFX(0 细胞DNA链断裂的保护作用。在进行彗星试验时，各组细胞经过一 定的处理后，O．25％胰蛋白酶消化制备细胞悬液(细胞浓度为105· 1061m1)，并用台盼兰排斥试验计算细胞存活率，经制片、细胞裂解、 解旋、电泳、荧光染料染色等步骤后在荧光显微镜下观察，用目镜测 微尺测定彗星尾长(彗头末端到彗尾末端的长度)作为DNA损伤程 度的评价指标。用SPSS软件作非参数统计。 结果 与对照组相比，Sjo，明显增加了0CL-64和CHL细胞的DNA迁 移距离(p，0．01)，且两种细胞对同一系列浓度SiO，的反应相类似。 在粉尘浓度为7．5～12叩驴lll的剂量范围内，彗星尾长随作用剂量的 增加而增加，其作用剂量与尾长均值与三次方程拟合较好；在相同作 用条件下，2小时组一般比l小时组引起更严重的DNA损伤。DFX (O．5~2．OmM)和Ver(2．5~20．0p咖1)能有效减轻90“咖dSiO，所 致的DNA损伤，其保护作用随浓度加大而增加，呈良好的剂量一效 ver作用 应关系。2．0mM的DFX可使彗星尾长减少2／3；20．0p,g／ml 后可尾长减至未作用组的】／5。L